血管细胞在肝癌介入热疗中的耐受性研究

发布时间：2022-02-21 16:47

　　目的:介入热疗成为治疗肝细胞癌的新方法,但血管细胞受到的损伤需要评估。原代内皮细胞相比以往研究的细胞系可以保留更多的蛋白结构和功能。因此提取原代内皮细胞进行体外实验,研究不同温度下的形态和活性变化及死亡模式,认识内皮细胞对热疗的耐受性规律,并以此为依据对介入热化疗的临床策略提出建议。去细胞技术可以保留组织内部完整的血管结构,可以用于建立体外热疗模型用以后续评估热疗对内皮细胞的影响。方法:用组织贴壁法分离培养内皮细胞,在41℃、43℃、45℃三个温度梯度下水浴研究原代内皮细胞的形态变化,并用荧光探针检测线粒体和细胞核的变化。用MTT法定量地检测不同温度和加热时间的内皮细胞活性,用流式细胞术定量检测细胞存活率和凋亡水平。用去细胞肝脏作为生物支架建立体外热疗模型。结果:41℃加热30min的温热刺激下原代内皮细胞不发生明显形态变化,43℃时会引起原代内皮细胞的发生体积皱缩、形态变圆、细胞间连接消失、线粒体致密聚集的现象。检测活性发现形态变化与细胞活性的下降对应,死细胞的绝对比例增多。延长热疗时间至1h细胞活性进一步下降,并且45℃加热后原代内皮细胞的活性再24h内持续下降,失去增殖能力。在热... 

【文章来源】：哈尔滨工业大学黑龙江省211工程院校985工程院校

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
名词术语表
第1章 绪论
    1.1 课题背景及研究的目的和意义
    1.2 肿瘤热疗的国内外发展概况
        1.2.1 发展历史
        1.2.2 热疗的原理
        1.2.3 热疗的方法
        1.2.4 介入热化疗的研究
    1.3 血管内皮细胞的功能
    1.4 细胞系与原代细胞
        1.4.1 细胞系
        1.4.2 原代细胞
    1.5 热刺激对内皮细胞的杀伤
        1.5.1 细胞坏死
        1.5.2 细胞凋亡
        1.5.3 热疗相关基因
    1.6 去细胞技术
        1.6.1 去细胞生物支架及其应用
        1.6.2 去细胞的原理和影响因素
        1.6.3 去细胞肝脏的研究
    1.7 本文的主要研究内容
第2章 原代内皮细胞热刺激下的形态研究
    2.1 引言
    2.2 实验材料及仪器
        2.2.1 实验试剂及其配制
        2.2.2 实验仪器
    2.3 实验步骤与方法
        2.3.1 原代内皮细胞培养
        2.3.3 水浴加热
        2.3.4 荧光探针检测
    2.4 实验结果
        2.4.1 大鼠原代内皮细胞的分离培养
        2.4.2 原代内皮细胞的热处理
        2.4.3 荧光探针检测
    2.5 讨论
    2.6 本章小结
第3章 原代细胞加热后的活性与凋亡研究
    3.1 引言
    3.2 实验材料及仪器
        3.2.1 细胞培养和水浴加热
        3.2.2 活性及凋亡检测试剂
        3.2.3 酶标仪
        3.2.4 流式细胞仪
    3.3 实验步骤与方法
        3.3.1 原代内皮细胞培养
        3.3.2 水浴加热
        3.3.3 细胞活性实验
        3.3.4 凋亡分析
    3.4 实验结果
        3.4.1 不同温度下原代内皮细胞的活性
        3.4.2 加热时间与恢复时间对活性的影响
        3.4.3 不同热刺激下内皮细胞的死亡类型
    3.5 讨论
    3.6 本章小结
第4章 热疗的去细胞肝脏模型的建立
    4.1 引言
    4.2 实验材料及仪器
    4.3 实验步骤和方法
        4.3.1 获取肝脏
        4.3.2 去细胞肝脏的制备
        4.3.3 去细胞肝脏重新内皮化
        4.3.4 石蜡切片的制备
        4.3.5 切片染色
    4.4 实验结果
        4.4.1 去细胞肝脏支架
        4.4.2 内皮化模型
    4.5 讨论
    4.6 本章小结
结论
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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[3]热化疗联合介入栓塞治疗中晚期原发性肝癌患者的疗效[J]. 侯倩倩,王大庆,肖杨,赵鹏.  中国肝脏病杂志(电子版). 2016(04)
[4]肝动脉介入热化疗治疗转移性肝癌的临床观察[J]. 赵秋菊,靳海英.  中国实用医药. 2016(22)
[5]入热化疗栓塞术联合体外高频热疗治疗中晚期原发性肝癌的临床疗效观察[J]. 文艺,王建明,王潇苓,张艳,王学权,罗莉蓉.  中国医药指南. 2012(34)
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[9]全身热疗联合奥沙利铂方案治疗晚期结直肠癌[J]. 王远东,徐岗,周明.  中国肿瘤. 2005(01)
[10]介入性热化疗治疗肝癌[J]. 曹玮,王执民,张洪新.  医师进修杂志. 2004(05)

博士论文
[1]热刺激条件下血管内皮细胞的形态变化及凋亡研究[D]. 周鸣杰.上海交通大学 2007



本文编号：3637661