EBV相关胃癌细胞中EBV通过TRAF2和ERK信号通路下调COX-2的研究

发布时间：2022-02-22 02:45

　　目的:与爱泼斯坦-巴尔病毒（Epstein-Barr virus,EBV）相关的胃癌,即EB病毒相关胃癌（Epstein-Barr virus-associated gastric cancer,EBVaGC）约占胃癌的近10%,由于胃癌在世界范围内的高发病率和病死率,EBVaGC发病的绝对数高,每年新发病例在90000以上,因此对EBVaGC发生机制以及其相关基因的研究具有重要意义。然而,迄今为止在EBV相关肿瘤中尚未见EBV潜伏膜蛋白2A（EBV-encoded Latent Membrane Protein 2A,LMP2A）与环氧合酶2（cyclooxygenase-2,COX-2）之间相关性的研究报道。EBV编码的潜伏膜蛋白1（EBV-encoded Latent Membrane Protein 1,LMP1）在EBVaGC中是否与COX-2相互作用也需要进一步研究。方法:（1）采用实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR）检测3种EBV阳性胃癌细胞系（GT38,GT39以及SNU719）和5种EBV阴性胃癌细胞系（SGC79... 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
引言
材料与方法
    1 所用仪器、试剂和耗材
        1.1 主要使用仪器
        1.2 主要使用试剂和耗材
        1.3 使用的试剂配制
    2 选择细胞系
    3 细胞处理
        3.1 细胞的复苏
        3.2 细胞的传代
    4 PTGS2基因启动子部分区域甲基化检测
        4.1 细胞系DNA的提取
        4.2 亚硫酸氢盐基因组测序(BGS)
    5 PTGS2 基因m RNA检测
        5.1 细胞系总RNA的提取
        5.2 反转录为cDNA
        5.3 实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)
        5.4 qRT-PCR结果数据分析
    6 胃癌细胞系中相关蛋白表达的检测
        6.1 蛋白提取
        6.2 Western blotting测蛋白表达
    7 microRNA的qRT-PCR检测
    8 细胞免疫荧光检测
    9 LMP1和LMP2A过表达细胞模型建立
        9.1 质粒的预备
        9.2 重组质粒转染胃癌细胞系SGC7901
    10 siRNA转染
    11 统计学分析
结果
    1 Real-time PCR检测胃癌细胞系中COX-2 的转录表达
    2 Western blotting检测胃癌细胞系中COX-2 蛋白表达
    3 COX-2编码基因启动子区域甲基化状态检测
    4 COX-2 相关3种micro RNA的检测结果
    5 COX-2蛋白在胃癌细胞系中的亚细胞定位检测
    6 外源性EBV潜伏膜蛋白LMP1和LMP2A稳定表达对COX-2 的影响
        6.1 外源性LMP1和LMP2A稳定表达SGC7901 细胞的筛选和建立
        6.2 外源性LMP1和LMP2A稳定过表达对COX-2 的影响
    7 外源性LMP1或LMP2A瞬时表达对COX-2 的影响
        7.1 建立外源性LMP1和LMP2A瞬时过表达的SGC7901 细胞
        7.2 外源性LMP1和LMP2A瞬时表达对COX-2 的影响
    8 干扰LMP1和LMP2A的表达对COX-2 的影响
    9 Western blotting检测TRAF2 在胃癌细胞系中的表达
    10 外源性LMP1和LMP2A表达对TRAF2 的影响
        10.1 外源性LMP1和LMP2A稳定表达对TRAF2 的影响
        10.2 外源性LMP1和LMP2A瞬时表达对TRAF2 的影响
    11 干扰LMP1和LMP2A表达对TRAF2 的影响
    12 靶向干扰TRAF2对COX-2 表达的影响
    13 Western blotting检测ERK信号分子在胃癌细胞系中的表达
    14 过表达LMP1 后对p-ERK的影响
    15 阻断ERK通路对COX-2 的影响
        15.1 MEK抑制剂PD0325901 阻断ERK通路
        15.2 小干扰序列阻断ERK通路
    16 阻断AKT通路对COX-2 表达的影响
        16.1 LY294002 阻断PI3K/AKT通路
        16.2 干扰Fox O1对COX-2 的影响
讨论
结论
参考文献
综述
    综述参考文献
攻读学位期间的学术成果
缩略词表
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]二甲双胍联合COX-2选择性抑制剂塞来昔布对胃癌SGC-7901细胞增殖凋亡的影响[J]. 张永恒,常廷民.  胃肠病学和肝病学杂志. 2019(04)
[2]Post-translational modifications of prostaglandin-endoperoxide synthase 2 in colorectal cancer:An update[J]. Rafael I Jaén,Patricia Prieto,Marta Casado,Paloma Martín-Sanz,Lisardo Boscá.  World Journal of Gastroenterology. 2018(48)
[3]Cyclooxygenase 2 in liver dysfunction and carcinogenesis: Facts and perspectives[J]. Paloma Martín-Sanz,Marta Casado,Lisardo Boscá.  World Journal of Gastroenterology. 2017(20)
[4]TCGA divides gastric cancer into four molecular subtypes:implications for individualized therapeutics[J]. Wei Zhang.  Chinese Journal of Cancer. 2014(10)
[5]Helicobacter pylori infection, gastrin and cyclooxygenase-2 in gastric carcinogenesis[J]. Yun Shao,Kun Sun,Wei Xu,Xiao-Lin Li,Hong Shen,Wei-Hao Sun.  World Journal of Gastroenterology. 2014(36)
[6]MicroRNA-143 suppresses gastric cancer cell growth and induces apoptosis by targeting COX-2[J]. Xiao-Li Wu,Bin Cheng,Pei-Yuan Li,Huan-Jun Huang,Qiu Zhao,Zi-Li Dan,Dean Tian,Peng Zhang.  World Journal of Gastroenterology. 2013(43)
[7]Role of cyclooxygenase-2 in gastric cancer development and progression[J]. Jian Cheng,Xiao-Ming Fan.  World Journal of Gastroenterology. 2013(42)
[8]健脾解毒方介导p38MAPK/ATF-2信号通路抑制幽门螺杆菌诱导的人胃癌细胞COX-2表达[J]. 刘宁宁,王炎,吴琼,周利红,刘宣,范忠泽,李琦.  中国中西医结合杂志. 2011(07)
[9]Meta-analysis of the relationship between Epstein-Barr virus infection and clinicopathological features of patients with gastric carcinoma[J]. LI ShuYing1,2, DU HaiJun3, WANG Zhan3, ZHOU Ling3, ZHAO XiaoYu1 & ZENG Yi3 1 College of Life Sciences, Hebei University, Baoding 071002, China; 2 Department of Pathogenic Biology, Faculty of Biological Science, North China Coal Medical College, Tangshan 063000, China; 3 National Institute for Viral Disease Control and Prevention, Chinese Center for Disease Control and Prevention (Chinese CDC), State Key Laboratory for Infectious Disease Prevention and Control (SKLID), Beijing 100052, China.  Science China（Life Sciences）. 2010(04)
[10]COX-2 in liver,from regeneration to hepatocarcinogenesis:What we have learned from animal models?[J]. Paloma Martín-Sanz,Rafael Mayoral,Marta Casado,Lisardo Boscá.  World Journal of Gastroenterology. 2010(12)



本文编号：3638533