干扰Brf1表达对非小细胞肺癌细胞生物学功能的影响

发布时间：2022-02-22 13:00

　　目的:肺癌在我国恶性肿瘤中死亡率位居首位,发病率也是逐年上升,主要以非小细胞肺癌为主,约占肺癌发病率的80%左右。Brf1作为PolⅢ基因的特异性调控因子,在肝癌、乳腺癌等恶性肿瘤中表达水平上调,并促进细胞转化及肿瘤的发生。但其在非小细胞肺癌中的作用尚不明确。本研究通过检测Brf1在非小细胞肺癌组织及癌旁肺组织中的表达情况,验证Brf1是否在非小细胞肺癌中存在高表达。然后应用CRISPR/Cas9系统特异性沉默人非小细胞肺癌细胞中BRF1基因的表达,观察其对非小细胞肺癌细胞生物学功能的影响。探讨Brf1成为非小细胞肺癌治疗靶点的可能性,为后续研究提供参考。方法:1.免疫组化法（S-P法）用于检测非小细胞肺癌组织和癌旁肺组织中Brf1的表达,比较Brf1表达水平与临床病例参数和预后之间的关系。通过Western blot法等验证Brf1是否在非小细胞肺癌细胞株中高度表达。2.根据BRF1基因的序列设计sgRNA,与经BsmBI酶切后的lenti-CRISPR v2质粒进行重组,得到特异性针对BRF1基因的CRISPR/Cas9重组质粒,利用该载体含有嘌呤霉素抗性的特性,筛选出敲除BRF1... 

【文章来源】：南昌大学江西省211工程院校

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
中英文缩略词表
第1章 引言
第2章 非小细胞肺癌中Brf1 表达与预后的关系
    2.1 前言
    2.2 实验材料
        2.2.1 临床资料
        2.2.2 主要仪器及耗材
        2.2.3 主要试剂
    2.3 实验方法
        2.3.1 Western blot
        2.3.2 实时荧光定量PCR实验(qRT-PCR)
        2.3.3 免疫组化
        2.3.4 统计学分析
    2.4 实验结果
        2.4.1 Brf1 在非小细胞肺癌组织和癌旁肺组织中的表达情况
        2.4.2 非小细胞肺癌患者Brf1 表达强度与临床病例特征的关系
        2.4.3 非小细胞肺癌患者生存分析
    2.5 讨论
第3章 干扰BRF1 表达对非小细胞肺癌细胞生物学功能的影响
    3.1 前言
    3.2 实验材料
        3.2.1 细胞株
        3.2.2 主要仪器及耗材
        3.2.3 主要试剂
    3.3 实验方法
        3.3.1 细胞培养
        3.3.2 Western blot
        3.3.3 构建并获取lenti-CRISPR v2-BRF1 重组质粒
        3.3.4 慢病毒的包装
        3.3.5 慢病毒转染及筛选稳转细胞株
        3.3.6 实时荧光定量PCR实验(qRT-PCR)
        3.3.7 CCK8 法检测细胞增殖
        3.3.8 Transwell小室实验
        3.3.9 统计学分析
    3.4 实验结果
        3.4.1 非小细胞肺癌细胞株中Brf1 的表达情况
        3.4.2 重组质粒的测序结果
        3.4.3 实时荧光定量PCR及 Western blot验证敲除效率
        3.4.4 CCK8 验证细胞增殖情况
        3.4.5 Transwell小室实验验证细胞迁移、侵袭情况
    3.5 讨论
第4章 主要结论与展望
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
论文综述
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]2013年中国恶性肿瘤发病和死亡分析[J]. 陈万青,郑荣寿,张思维,曾红梅,邹小农,赫捷.  中国肿瘤. 2017(01)
[2]中国晚期原发性肺癌诊治专家共识（2016年版）[J]. 石远凯,孙燕,于金明,丁翠敏,王子平,王长利,王东,王存德,王征,王孟昭,支修益,卢铀,冯继锋,刘云鹏,刘晓晴,刘巍,伍钢,李小梅,李凯,李恩孝,李薇,陈公琰,陈正堂,余萍,吴宁,吴密璐,肖文华,张力,张沂平,张树才,杨树军,宋霞,林冬梅,罗荣城,单莉,周彩存,周宗玫,赵琼,胡成平,胡毅,郭其森,常建华,黄诚,曾瑄,韩宝惠,韩晓红,郏博,韩颖,黄昱.  中国肺癌杂志. 2016(01)
[3]中国肺癌发病死亡的估计和流行趋势研究[J]. 陈万青,张思维,邹小农.  中国肺癌杂志. 2010(05)
[4]中国肺癌死亡趋势分析及发病、死亡的估计与预测[J]. 杨玲,李连弟,陈育德,Donald Maxwell Parkin.  中国肺癌杂志. 2005(04)



本文编号：3639493