间质干细胞亚群及其胞外囊泡对卵巢癌和乳腺癌影响的研究

发布时间：2022-02-23 22:16

　　目的:本研究尝试将我们新发现的抗肿瘤间质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）亚群及其来源的胞外囊泡（Extracellular vesicles,EVs）应用于女性恶性肿瘤（卵巢癌和乳腺癌）的治疗。深入探讨CD90^low MSCs亚群在肿瘤治疗中的作用,并为肿瘤的治疗提供理论依据和治疗靶点。为EVs作为一种新型有效的治疗或药物传递媒介提供依据,同时也为治疗其它类型肿瘤提供新的思路和见解。方法:（1）对不同组织进行酶消化法分离培养获得骨髓来源间质干细胞（Bone marrow-derived MSCs,BM-MSCs）、骨密质来源间质干细胞（Compact bone-derived MSCs,CB-MSCs）和脂肪来源间质干细胞（Adipose-derived mesenchymal stem cells,ADSCs）。（2）利用细胞的形态特征、流式细胞术分析细胞表面标志和多向分化能力的检测对MSCs进行鉴定。（3）利用卵巢癌小鼠肿瘤模型评价CB-MSCs、BM-MSCs和CB-MSCs与VIC-008联合的抗肿瘤效果。（4）利用qRT-... 

【文章来源】：江苏大学江苏省

【文章页数】：129 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

BM-MSCs和CB-MSCs形态特征

间质干细胞亚群及其胞外囊泡对卵巢癌和乳腺癌影响的研究34图3.2流式细胞术鉴定BM-MSCs和CM-MSCs表面标记A：流式细胞术设门策略；B：BM-MSCs表面标记表达分析；C：CB-MSCs表面标记表达分析Figure.3.2IdentificationofBM-MSCsandCM-MSCsbyflowcytometryA：Gatedstrategyofflowcytometry；B：ExpressionanalysisofBM-MSCssurfacemarkers；C：ExpressionanalysisofCB-MSCssurfacemarkers3.4.3.CB-MSCs表达更高的SCA-1和更低的CD90与BM-MSCs相比不同来源的MSCs是一类具有异质性群体的细胞混合体[198]。通过流式细胞术对P3代细胞表面标记进行鉴定分析，结果显示在CB-MSCs中CD29+SCA-1+的亚群百分比为67.7%，而在BM-MSCs中CD29+SCA-1+的亚群百分比仅为32.4%；另外，在CB-MSCs中CD73+CD90+的亚群百分比为10.2%，在BM-MSCs中CD73+CD90+的亚群百分比为33.6%（图3.3A）。通过流式细胞术单独分析SCA-1和CD90表面标志，结果同样显示CB-MSCs表达更高的SCA-1和更低的CD90与BM-MSCs相比具有统计学意义（将低表达CD90的CB-MSCs定义为CD90lowCB-MSCs）（图3.3B）。通过流式细胞分选SCA-1+的阳性MSCs并进行培养，在显微镜下观察能发现SCA-1-和SCA-1+亚群表现出不同的形态，SCA-1-亚群MSCs呈小而圆的形状，而SCA-1+亚群MSCs呈大而伸长的形状（图3.3C）。据报道，CD90的表达减少与人类MSCs免疫抑制活性的丧失有关[199]，因此在CB-

江苏大学博士学位论文35MSCs中观察到的低CD90表达可能表明免疫抑制功能的丧失，从而使肿瘤靶向T细胞能够执行其肿瘤杀伤能力。图3.3CB-MSCs表达更高的SCA-1和更低的CD90A：CB-MSCs和BM-MSCs流式分析表面标记；B：统计CB-MSCs和BM-MSCs中Sca-1和CD90阳性的比例；C：经分选后的Sca-1阴性细胞和阳性细胞的形态观察（20×）*P<0.05和**P<0.01Figure.3.3CB-MSCsexpresshigherSca-1andlowerCD90comparedtoBM-MSCsA：RepresentativecytometricdotplotsofCB-MSCandBM-MSCs；B：PercentageofSca-1andCD90positivepopulationinCB-MSCsandBM-MSCs；C：MicroscopicimagesofsortedSca-1negative(left)andpositivecells(right),(20×magnification)*P<0.05and**P<0.013.4.4.BM-MSCs和CB-MSCs多向分化能力鉴定接下来，我们检测了BM-MSCs和CB-MSCs分化为典型间质细胞类型的能力：即脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞诱导分化。当BM-MSCs和CB-MSCs在各自相应的诱导分化培养基中培养时，它们能够成功分化为脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞。经过大约14天成脂诱导后，我们能够在显微镜下清楚的观察到未染色的细胞胞浆中有大小不一的圆形且折光性较强脂肪滴形成（图3.4A，左边部分），通过油红O染色便可以清楚的看到染成橘红色或红色的脂肪滴（图3.4A，右边部分）；经过大约21天成骨诱导后，通过茜素红染色，在显微镜下观察能够发现被茜素红染成红色的阳性骨细胞（图3.4B）；同样经过大约21天成软骨诱导后，通过阿尔新蓝和核固红染色可以发现诱导后的细胞胞浆大部分被染成蓝色阳性软骨细胞，其细胞核被染成红色（图3.4C）。上述结果表明BM-MSCs

【参考文献】：
期刊论文
[1]Transplanting embryonic stem cells onto damaged human corneal endothelium[J]. Charles Hanson,Arsaell Arnarsson,Thorir Hardarson,Ann Lindg?rd,Mandana Daneshvarnaeini,Catarina Ellerstr?m,Anita Bruun,Ulf Stenevi.  World Journal of Stem Cells. 2017(08)
[2]Homing and migration of mesenchymal stromal cells: How to improve the efficacy of cell therapy?[J]. Ann De Becker,Ivan Van Riet.  World Journal of Stem Cells. 2016(03)
[3]Roles of micro RNA-140 in stem cell-associated early stage breast cancer[J]. Benjamin Wolfson,Gabriel Eades,Qun Zhou.  World Journal of Stem Cells. 2014(05)



本文编号：3641423