新型C-PC/CMC-CD59sp纳米微球的制备及其对HeLa细胞的靶向抗肿瘤研究

发布时间：2022-07-11 14:05

　　目的:制备一种新型的以CD59配体肽（CD59 specific ligand peptide,CD59sp）为引导肽,负载藻蓝蛋白（C-phycocyanin,C-PC）的羧甲基壳聚糖（Carboxymethyl chitosan,CMC）纳米微球（C-PC/CMC-CD59sp）,并对其特征及靶向抗肿瘤机制进行研究,以实现藻蓝蛋白对HeLa细胞的靶向治疗。方法:采用离子交联法制备靶向羧甲基壳聚糖纳米载药颗粒,用响应面优化法选出最佳条件。利用透射电镜、激光粒度仪、红外光谱仪等观察纳米微球表征,MTT法检测靶向纳米颗粒对He La细胞生长的影响,溶血实验检测纳米颗粒的组织相容性及安全性,共聚焦显微镜检测He La细胞对纳米微球的摄入及纳米微球对He La细胞形态的影响,western blot检测cleaved caspase-3和cleaved PARP蛋白的表达,免疫荧光法检测Bcl-2蛋白的表达,流式细胞术检测He La细胞周期的变化。结果:优化了纳米微球的制备条件,获得纳米级微球。最佳制备条件为:CMC与C-PC投药量为3:1,CMC浓度为2.0mg/ml,Ca Cl2浓度为1... 

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
第一章 实验材料和方法
    1.1 材料
        1.1.1 药品
        1.1.2 试剂
        1.1.3 仪器
        1.1.4 细胞株及血液
    1.2 纳米微球的制备
        1.2.1 藻蓝蛋白浓度测定
        1.2.2 C-PC/CMC-NPs制备
        1.2.3 优选制备条件
        1.2.4 靶向纳米微球制备
    1.3 纳米微球性质检测
        1.3.1 透射电镜检测
        1.3.2 激光粒度仪检测
        1.3.3 红外光谱仪检测
        1.3.4 包封率和载药量测定
        1.3.5 药物体外释放测定
        1.3.6 药物安全性评价
    1.4 纳米微球体外细胞实验
        1.4.1 细胞培养及爬片
        1.4.2 细胞实验分组
        1.4.3 MTT法检测药物对细胞增殖的影响
        1.4.4 共聚焦显微镜检测细胞对纳米微球的摄入情况
        1.4.5 免疫荧光法检测Bcl-2 蛋白的表达
        1.4.6 Western Blot法检测cleaved caspase-3/PARP蛋白的表达
        1.4.7 共聚焦显微镜检测细胞形态变化
        1.4.8 流式细胞术检测对细胞周期的影响
    1.5 统计学分析
第二章 实验结果
    2.1 C-PC/CMC-NPs性质检测
        2.1.1 优选制备条件
        2.1.2 表面形态
        2.1.3 粒径分布
        2.1.4 官能团变化
        2.1.5 药物体外释放
        2.1.6 药物安全性评估
    2.2 细胞相关实验检测
        2.2.1 纳米微球抑制细胞的增殖
        2.2.2 纳米微球靶向摄入细胞
        2.2.3 免疫荧光检测Bcl-2 蛋白的表达水平
        2.2.4 Western Blot检测cleaved caspase-3/PARP蛋白的表达水平
        2.2.5 共聚焦显微镜观察细胞的形态变化
        2.2.6 流失细胞仪检测细胞周期的变化
第三章 讨论
结论
参考文献
综述
    综述参考文献
攻读学位期间的研究成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]藻蓝蛋白/羧甲基壳聚糖纳米球的制备及其对人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制[J]. 吕丛仪,李冰,杨鹏.  中国肿瘤生物治疗杂志. 2015(01)
[2]Ag/低分子量壳聚糖复合胶乳的制备及抗菌性能[J]. 王德松,张艳艳,安静,罗青枝,李雪艳.  复合材料学报. 2014(05)
[3]纳米固体脂质体及其在化妆品中的应用研究进展[J]. 刘晓慧,李琼,陈良红,张婉萍.  日用化学工业. 2013(06)
[4]基于细乳化/溶剂蒸发法制备复合纳米色素[J]. 赵晓,刘佳伟,代洪军,陈永俊.  化工学报. 2014(03)
[5]静电纺丝技术制备载药聚乙烯醇-海藻酸钠纳米纤维[J]. 李沉纹,管海燕,李卓恒,于彩平,罗明和,卢来春.  中国药学杂志. 2013(12)
[6]钝顶螺旋藻藻蓝蛋白稳定性研究[J]. 欧瑜,叶瑞玲.  食品研究与开发. 2013(04)
[7]采用离子交联法制备壳聚糖胰岛素纳米粒的研究进展[J]. 欧歌,廖德华,张凯,戴伟,向大雄.  中南药学. 2013(02)
[8]壳聚糖抗肿瘤缓释药物的特征[J]. 令亚琴.  中国组织工程研究. 2013(08)
[9]超声辅助沉淀法制备疏水性纳米SiO2[J]. 宋英泽,宋丽贤,卢忠远,芦艾,王杰,周浩.  人工晶体学报. 2012(02)
[10]离子交联法制备壳聚糖纳米颗粒[J]. 魏谭军,董德刚,裘梁,余丽芳,陈晓东.  安徽农业科学. 2012(05)

博士论文
[1]骨修复和骨病治疗药物载体CPP/CS复合材料的仿生合成及性能研究[D]. 张志斌.四川大学 2007

硕士论文
[1]可共载化疗药物和基因以协同增强其抗肿瘤功效的叶酸修饰两亲性壳聚糖纳米载体[D]. 余波杰.复旦大学 2014



本文编号：3658298