MBD3通过Hippo信号通路抑制胰腺癌细胞的干性

发布时间：2022-07-13 11:47

　　研究目的:胰腺癌是消化系统肿瘤之一,其恶性程度极高、预后极差的根本原因是早期诊断难度大和转移快。本文旨在探究DNA甲基化结合蛋白3（Methyl-CpG-binding domain 3,MBD3）对胰腺癌细胞增殖等生物学功能的作用,初步阐明其调控胰腺癌细胞干性的潜在作用机制,为今后MBD3在胰腺癌临床诊断和预后中的应用提供可靠的理论依据。研究方法:首先通过荧光定量PCR实验和Western blot实验检测MBD3在三种胰腺癌细胞中的表达情况并验证Flag-MBD3和sh-MBD3质粒的干扰和过表达效果。接着使用克隆形成实验、干细胞成球实验和动物实验检测MBD3对胰腺癌细胞增殖和干性的影响。采用Western blot实验检测MBD3对胰腺癌细胞中干性相关指标和Hippo/YAP信号转导通路相关指标的变化。分析TCGA数据库中MBD3和YAP表达量的关系,采用免疫沉淀（IP）实验、免疫荧光试验和核浆分离试验分析MBD3对YAP的影响。研究结果:荧光定量PCR和Western blot实验结果表明MBD3在SW1990、PaTu8988和PANC1细胞中mRNA和蛋白表达水平逐渐升高。... 

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
主要缩略词表
第一章 绪论
    1.1 研究背景
        1.1.1 胰腺癌
        1.1.2 DNA甲基化结合蛋白3
        1.1.3 干性
        1.1.4 Hippo通路
    1.2 本研究的目的、内容、方法与技术路线
        1.2.1 研究目的
        1.2.2 研究内容
        1.2.3 研究意义
        1.2.4 研究技术路线图
第二章 MBD3在胰腺癌细胞中的表达
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验细胞
        2.1.2 实验耗材
        2.1.3 实验仪器
        2.1.4 实验试剂
        2.1.5 常用试剂配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞的传代、冻存及复苏
        2.2.2 细胞总RNA提取
        2.2.3 qPCR检测方法
        2.2.4 Western blot检测方法
        2.2.5 CCLE数据库分析
    2.3 数据处理与统计方法
    2.4 结果
        2.4.1 在多种癌组织中MBD3 在胰腺癌组织中的表达量较低
        2.4.2 MBD3 在胰腺癌组织中m RNA水平的表达情况
        2.4.3 MBD3 与胰腺癌患者病理分期的关系
        2.4.4 MBD3 与胰腺癌患者预后正相关
        2.4.5 MBD3 在三种胰腺癌细胞中的表达水平
    2.5 讨论
第三章 MBD3 对胰腺癌细胞增殖和干性的影响
    3.1 实验仪器和材料
        3.1.1 实验仪器
        3.1.2 实验耗材
        3.1.3 实验试剂
        3.1.4 试剂配制
    3.2 实验方法
        3.2.1 感受态细胞的制备
        3.2.2 质粒的扩增与提取
        3.2.3 病毒包装
        3.2.4 感染细胞
        3.2.5 质粒转染
        3.2.6 细胞计数
        3.2.7平板克隆形成实验
        3.2.8干细胞成球实验
        3.2.9 细胞培养、Western blot
    3.3 数据处理与统计方法
    3.4 结果
        3.4.1 Flag-MBD3和sh-MBD3 质粒效果验证
        3.4.2 MBD3 抑制胰腺癌细胞的克隆形成能力
        3.4.3 MBD3 抑制胰腺癌细胞的干性
        3.4.4 MBD3 抑制胰腺癌细胞的脂质合成
        3.4.5 MBD3 促进胰腺癌细胞的自噬
    3.5 讨论
第四章 MBD3 对胰腺癌细胞干性影响的分子机制
    4.1 实验仪器和材料
        4.1.1 实验仪器
        4.1.2 实验耗材
        4.1.3 实验试剂
        4.1.4 试剂配制
    4.2 实验方法
        4.2.1 免疫荧光
        4.2.2 细胞核与细胞浆蛋白分离提取
        4.2.3 双荧光素酶报告基因检测
        4.2.4 质粒转染、细胞培养、Western blot
        4.2.5 肿瘤数据库分析
        4.2.6免疫沉淀(IP)实验
        4.2.7动物实验
    4.3 数据处理与统计方法
    4.4 结果
        4.4.1 MBD3 促进胰腺癌Hippo/YAP信号通路的激活
        4.4.2 MBD3与YAP的表达量在胰腺癌细胞中成负相关
        4.4.3 MBD3与YAP结合
        4.4.4 MBD3 抑制胰腺癌细胞中YAP的核转位
        4.4.5 MBD3 抑制胰腺癌细胞中YAP的转录活性
        4.4.6 MBD3 抑制胰腺癌细胞的致瘤性
        4.4.7 YAP在三种胰腺癌细胞中的表达量
        4.4.8 胰腺癌细胞中YAP抑制MBD3 的表达
    4.5 讨论
结论与展望
参考文献
致谢
攻读硕士期间发表论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]Epigenetic regulation of prostate cancer:the theories and the clinical implications[J]. Yiji Liao,Kexin Xu.  Asian Journal of Andrology. 2019(03)
[2]Epidemiology of pancreatic cancer[J]. Milena Ilic,Irena Ilic.  World Journal of Gastroenterology. 2016(44)



本文编号：3659986