Beclin1和ROS依赖的自噬在Bcl-2抑制剂ABT-737诱导的人肝癌耐药细胞株HepG-2/ADM凋亡中的作用机

发布时间：2022-07-19 15:13

　　人肝细胞癌是位于世界第三位导致患者死亡的恶性肿瘤,是严重危害人类健康的重大疾病。手术是最为有效而确切的治疗手段,但由于肝癌起病隐匿且恶性程度高,大部分患者发现时即已属晚期,丧失手术机会,故化疗仍然是晚期肝癌治疗的重要手段,但肝癌的多药耐药性的发生常导致治疗失败。目前研究表明,肝细胞癌等恶性肿瘤常高表达Bcl-2蛋白家族内Bcl-2、Bcl-XL等抗凋亡蛋白,通过调节抗凋亡蛋白和促凋亡蛋白间的平衡,使肿瘤发生凋亡逃逸。因此抑制Bcl-2的过表达将成为一种有效的肿瘤治疗方法。目前开发出的ABT-737是一种BH3蛋白模拟物,能够特异性地抑制Bcl-2/Bcl-XL等在BH3结构域与Bax/Bak的结合,从而诱导凋亡。诸多学者认为自噬可以在肿瘤形成的初始阶段起到抑制作用,但后期肿瘤细胞往往可通过自噬应答降低化疗药物的杀伤作用。研究表明,自噬通过降解受损的细胞器及细胞内老化蛋白质等,促进细胞修复和生存,在治疗中常使肿瘤细胞免受凋亡和坏死,成为肿瘤耐药的重要的机制之一。目前临床上亦采用Bcl-2抑制剂ABT-737进行肝细胞癌治疗的研究,但由于ABT-737可以通过某些因素诱导自噬,常导致耐药的... 

【文章页数】：86 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩略语索引
第1章 文献综述
    1.1 肝细胞癌
        1.1.1 概述
        1.1.2 肝细胞癌的治疗
    1.2 Bcl-2 蛋白家族
        1.2.1 Bcl-2 蛋白家族概述
        1.2.2 Bcl-2 蛋白家族调节细胞凋亡
        1.2.3 Bcl-2 蛋白家族调节细胞自噬
        1.2.4 以Bcl-2 蛋白为靶点的小分子化合物ABT-737
    1.3 凋亡
        1.3.1 概述
        1.3.2 凋亡和自噬的关系
    1.4 自噬
        1.4.1 概述
        1.4.2 自噬与肿瘤耐药
        1.4.3 活性氧（ROS）与自噬
第2章 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 实验试剂
        2.1.2 实验仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 细胞增殖实验
        2.2.3 细胞凋亡检测
        2.2.4 ROS检测
        2.2.5 蛋白浓度的测定
        2.2.6 Westernblot
        2.2.7 免疫荧光标记及激光共聚焦显微镜
        2.2.8 TUNEL检测法
        2.2.9 细胞瞬时转染及Beclin1基因敲除
        2.2.10 统计分析
第3章 实验结果
    3.1 ABT-737 抑制人肝癌阿霉素耐药细胞株HepG-2/ADM细胞生长并诱导细胞凋亡
        3.1.1 HepG-2/ADM细胞的Bcl-2 蛋白表达水平高于HepG-2 细胞..293.1.2 ABT-737 抑制Hep G-2/ADM细胞生长
        3.1.2 ABT-737 诱导Hep G-2/ADM细胞凋亡
    3.2 ABT-737 诱导人肝癌阿霉素耐药细胞株HepG-2/ADM细胞Beclin1依赖的自噬
        3.2.1 ABT-737 诱导Hep G-2/ADM细胞自噬
        3.2.2 ABT-737 诱导HepG-2/ADM细胞发生Beclin1依赖的自噬..37
    3.3 ABT-737 诱导ROS产生并诱导人肝癌阿霉素耐药细胞株HepG-2/ADM细胞发生ROS介导的自噬
        3.3.1 ABT-737 诱导Hep G-2/ADM细胞中ROS的生成
        3.3.2 ABT-737 诱导Hep G-2/ADM细胞发生ROS介导的自噬
    3.4 抑制ROS能增加ABT-737 诱导的人肝癌阿霉素耐药细胞株HepG-2/ADM细胞凋亡
    3.5 抑制自噬能增加ABT-737 诱导的人肝癌阿霉素耐药细胞株HepG-2/ADM细胞凋亡
第4章 讨论
第5章 结论
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢



本文编号：3663649