Pin1在黑色素瘤干细胞中的作用

发布时间：2022-07-20 19:37

　　研究目的:探讨Pin1在黑色素瘤干细胞中的作用及Pin1靶向药物治疗的潜在作用,为黑色素瘤的治疗提供实验基础和开拓新的思路。研究方法:1.通过包装PIN1 shRNA慢病毒、感染黑色素瘤细胞及药物筛选,获得稳定敲减Pin1基因的黑色素瘤细胞株。用Western Blot和流式细胞术探索敲减黑色素瘤细胞Pin1基因后干细胞标志物的表达水平。2.敲减黑色素瘤细胞Pin1基因,利用软琼脂克隆形成实验探索黑色素瘤细胞克隆增殖和采用黑色素瘤干细胞微球形成方法探讨干细胞微球形成能力。3.在裸鼠后翼一侧皮下注射1*10^6个敲减Pin1基因的黑色素瘤细胞,另一侧注射同数量的对照细胞,探讨敲减Pin1基因的黑色素瘤细胞裸鼠体内致瘤性。4.敲减Pin1基因的黑色素瘤细胞梯度稀释行裸鼠皮下成瘤实验探讨黑色素瘤干细胞的致瘤性。5.裸鼠随机分为实验组和对照组,实验组裸鼠尾静脉注射2*10^6个敲减Pin1基因的黑色素瘤细胞,对照组注射同数量的对照细胞,探讨黑色素瘤细胞Pin1基因敲减后裸鼠肺部转移能力。6.黑色素瘤细胞注射裸鼠皮下,成瘤后随机分组,单药处理分2组,联合用药处理分4组,用Pin1抑制剂ATRA或... 

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
附录
中文摘要
英文摘要
前言
材料和方法
    1.材料
        1.1 细胞株
        1.2 主要试剂及试剂盒
        1.3 主要抗体
        1.4 主要试剂溶液及配制
        1.5 慢病毒表达系统
    2.方法
        2.1 普通细胞培养及黑色素瘤干细胞成球培养
        2.2 慢病毒的制备
        2.3 慢病毒感染黑色素瘤细胞及筛选
        2.4 软琼脂克隆形成实验
        2.5 Westernblot
        2.6 流式细胞仪检测干细胞相关标志物
        2.7 免疫组织化学染色及结果判定标准
        2.8 动物模型的构建
        2.9 数据分析
结果
    1.Pin1基因干扰对黑色素瘤干细胞的影响
        1.1 敲减Pin1基因下调NANOG干性标志物和上调MITF分化相关标志物
        1.2 敲减Pin1基因同时下调CD271和ALDH干细胞标志物表达
        1.3 敲减Pin1基因抑制黑色素瘤细胞克隆增殖及干细胞的微球形成
    2.黑色素瘤细胞敲减Pin1基因抑制肿瘤生长
    3.敲减Pin1基因的黑色素瘤细胞梯度稀释裸鼠致瘤的研究
    4.黑色素瘤细胞敲减Pin1基因抑制裸鼠肺部转移
    5.Pin1抑制剂ATRA抑制裸鼠黑色素瘤细胞皮下荷瘤的生长
    6.Pin1抑制剂ATRA联合Vemurafenib治疗黑色素瘤的研究
    7.人黑色素瘤组织芯片检测Pin1的表达
讨论
结论
参考文献
综述
    参考文献
致谢



本文编号：3664633