内质网应激在棕榈酸诱导肝癌细胞凋亡中的作用

发布时间：2017-05-15 03:02

  本文关键词：内质网应激在棕榈酸诱导肝癌细胞凋亡中的作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:研究内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)信号调控对棕榈酸(palmitic acid,PA)诱导肝癌细胞凋亡的影响及其机制。方法:本实验培养人肝癌细胞SMMC-7721,用衣霉素(tunicamycin,Tun)作为诱导ERS的阳性对照,用内质网应激抑制剂4-苯丁酸(4-phenyl butyric acid,PBA)抑制内质网应激的活化,用PA进行处理诱导脂代谢紊乱,用葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)表达质粒转染模拟GRP78高表达。处理SMMC-7721细胞后,反转录多聚酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测时间梯度PA处理的SMMC-7721细胞中内质网应激活化的分子标志物;实时荧光定量PCR检测ERS活化分子标志物在mRNA水平的诱导;显微镜下观察SMMC-7721细胞死亡;Annexin V-FITC流式细胞技术检测SMMC-7721细胞的凋亡情况;Western blot技术检测SMMC-7721细胞中内质网应激活化的相关分子和凋亡相关分子等。结果:(1)PA诱导了肝癌细胞SMMC-7721发生内质网应激反应:RT-PCR结果表明PA不仅诱导了XBP1的活化剪切,也诱导了CHOP和GRP78在转录水平的增加,实时荧光定量PCR也证实了PA对ERS活化分子标志XBP1、CHOP和GRP78在mRNA水平的诱导。(2)PA诱导肝癌细胞死亡:光学显微镜下观察细胞形态发现SMMC-7721细胞出现了时间依赖性死亡。(3)PA诱导肝癌细胞凋亡:Western blot结果表明PA诱导了SMMC-7721细胞呈时间依赖性的PARP活化剪切;Annexin V-FITC流式细胞检测表明PA诱导了SMMC-7721细胞发生时间依赖性凋亡(P0.001)。(4)内质网应激促进PA诱导肝癌细胞凋亡:Western blot结果表明使用PBA明显降低了PA对SMMC-7721细胞PARP活化剪切的诱导;Annexin V-FITC流式细胞检测结果也表明PBA处理显著抑制了PA诱导的SMMC-7721细胞凋亡(P0.001)。(5)肝癌细胞SMMC-7721耐受内质网应激诱导剂Tun诱导的凋亡:Western blot结果表明Tun处理SMMC-7721细胞没有引起明显的PARP活化剪切;流式细胞检测凋亡的结果也表明Tun几乎没有诱导SMMC-7721细胞发生凋亡。(6)PA和Tun差异性诱导肝癌细胞UPR信号系统:RT-PCR和实时荧光定量PCR结果显示,与Tun相比,PA诱导的XBP1活化出现晚但诱导活化的高水平维持时间长;Western blot结果也显示PA诱导的GRP78明显低于Tun的诱导作用。(7)GRP78抑制PA诱导的肝癌细胞SMMC-7721凋亡:Western blot和流式细胞结果均表明过表达GRP78明显抑制了PA诱导的肝癌细胞凋亡(P0.05)。结论:本研究发现内质网应激反应在PA诱导的肝癌细胞SMMC-7721凋亡中的重要作用,GRP78的表达不足与PA诱导的肝癌细胞凋亡密切相关,GRP78可望成为治疗脂代谢紊乱性肝病的潜在靶点。
【关键词】：内质网应激反应 凋亡 棕榈酸 葡萄糖调节蛋白78
【学位授予单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 摘要4-6
• abstract6-9
• 前言9-14
• 材料和方法14-25
• 结果25-38
• 讨论38-45
• 参考文献45-51
• 英汉缩略名词对照表51-53
• 附录 胆管癌细胞中IL-6/Stat3通路对c-Met的调控53-64
• 前言54-56
• 1 实验材料和仪器56
• 2 方法56-57
• 结果57-59
• 讨论59-61
• 参考文献61-64
• 致谢64-65
• 内质网应激与肿瘤 综述65-80
• 参考文献74-80

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