泛素偶联酶UBE2C在胃癌中的作用及机制研究

发布时间：2022-08-07 16:45

　　目的:泛素偶联酶（ubiquitin-conjugating enzyme）UBE2C的主要功能是作为促细胞有丝分裂后期复合物（anaphase promoting complex/cyclosome,APC/C）泛素连接酶（E3）的一种泛素偶联酶,参与细胞周期蛋白和有丝分裂相关因子的泛素化修饰过程,从而发挥其促进细胞有丝分裂进程的作用。UBE2C的过表达能够抑制有丝分裂纺锤体检查点（spindle assembly checkpoint,SAC）,使其失去监测功能,引起APC/C的持续活化及CyclinB的泛素化降解,最终导致染色体的错误分离,以及非整倍体细胞的产生。早期研究表明,UBE2C的过表达能够促进肿瘤的增殖和侵袭,并与肿瘤预后密切相关。然而,目前UBE2C在胃癌发生发展中的作用及机制有待于进一步研究。本课题旨在通过检测UBE2C在胃癌组织及血清中的表达情况,分析其与胃癌患者的临床、病理特征以及患者预后的相关性,并探讨其作为胃癌血清分子标志物的可能性;同时,通过体外细胞实验进一步阐明UBE2C在胃癌细胞增殖、凋亡和细胞周期调控中的作用及机制,从而为胃癌的早期诊断治疗及精准治疗... 

【文章页数】：126 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
缩略语/符号说明
前言
    研究现状、成果
    研究目的、方法
    结果
一、UBE2C在胃癌组织中的表达及临床意义
    1.1 对象和方法
        1.1.1 实验对象
        1.1.2 主要仪器
        1.1.3 实验材料
        1.1.4 实验试剂
        1.1.5 试验方法
            1.1.5.1 WesternBlot
            1.1.5.2 qRT-PCR
            1.1.5.3 HE染色
            1.1.5.4 IHC
    1.2 结果
        1.2.1 UBE2C蛋白在胃癌及癌旁正常组织中表达情况
            1.2.1.1 WesternBlot结果
            1.2.1.2 qRT-PCR检测结果
        1.2.2 免疫组化结果
            1.2.2.1 UBE2C在胃癌中的表达
            1.2.2.2 胃癌患者UBE2C蛋白表达与Ki67、Her-2的关系
            1.2.2.3 UBE2C蛋白表达与胃癌患者临床病理参数之间的关系
        1.2.3 Kaplan-Meier曲线结果
        1.2.4 预后因素分析
    1.3 讨论
        1.3.1 UBE2C蛋白表达与患者年龄
        1.3.2 UBE2C蛋白表达与淋巴结转移
        1.3.3 UBE2C表达与浆膜浸润
        1.3.4 UBE2C蛋白表达与Ki-67的关系
        1.3.5 UBE2C蛋白表达与Her-2的关系
    1.4 小结
二、慢病毒介导RNA干扰UBE2C基因对胃癌细胞株作用的实验研究
    2.1 对象和方法
        2.1.1 实验对象
        2.1.2 主要仪器
        2.1.3 实验试剂
        2.1.4 实验方法
            2.1.4.1 细胞培养
            2.1.4.2 Westernbolt
            2.1.4.3 慢病毒颗粒构建、转化、重组、提取及滴度测定
            2.1.4.4 慢病毒转染胃癌细胞及检测UBE2C基因沉默水平
            2.1.4.5 WST-1法检测细胞增殖
            2.1.4.6 流式细胞技术检测细胞周期
            2.1.4.7 流式细胞技术检测细胞凋亡
            2.1.4.8 统计学分析
    2.2 结果
        2.2.1 UBE2C蛋白在细胞系中表达情况
        2.2.2 质粒构建测序、敲降效率的验证
        2.2.3 敲降UBE2C后对细胞增殖的影响
        2.2.4 流式细胞技术检测细胞周期
        2.2.5 流式细胞技术检测敲降UBE2C后对细胞凋亡结果
        2.2.6 敲降UBE2C表达对相关蛋白及通路的影响
    2.3 讨论
    2.4 小结
三、胃癌患者血清中UBE2C表达的初步研究
    3.1 对象与方法
        3.1.1 标本收集
        3.1.2 仪器与试剂
        3.1.3 研究方法
        3.1.4 统计学分析
    3.2 结果
        3.2.1 胃癌患者、慢性胃炎患者及正常人群血清UBE2C含量
        3.2.2 胃癌患者手术前后血清中UBE2C的含量
        3.2.3 胃癌患者血清中UBE2C的含量与临床、病理参数之间的关系
    3.3 讨论
        3.3.1 胃癌患者血清中UBE2C的含量
        3.3.2 胃癌患者手术前后血清中UBE2C含量
        3.3.3 胃癌患者血清中UBE2C蛋白表达与Lauren分型
    3.4 小结
全文结论
论文创新点
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
附录
综述 泛素偶联酶UBE2C与肿瘤的关系
    参考文献
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3670681