Eya2在前列腺癌中过表达，通过AKT/Bcl-2通路调控前列腺癌细胞线粒体功能及多西紫杉醇敏感性

发布时间：2022-08-13 17:59

　　目的:前列腺癌在我国发病率逐年增高,且随着年龄增加有递增趋势^[1]。前列腺癌患者在患病前期没有明显的症状,目前也缺乏有效的早期诊断方法,少数在早期诊断出前列腺癌的患者多为正常体检时意外发现。多数患者在确诊时已经发展为晚期前列腺癌,丧失了前列腺根除术的合适时机^[2-4]。因此及早诊断和治疗对前列腺癌患者至关重要。生物标记物检测对于恶性肿瘤的早期诊断近年来是临床研究的重点内容。Eya2（eyes absent homolog2）是EYA家族蛋白之一,具有高度保守的EYA结构域,该家族成员可以编码一系列转录辅助因子^[5]。近些年来,一些研究表明Eya2参与一些癌症的发展,在包括肺癌,头颈癌,宫颈癌以及胶质瘤中等恶性肿瘤中均存在Eya2异常表达的现象^[6-9]。在本课题研究中我们将探究Eya2在前列腺癌中的表达模式,临床意义,表达差异对前列腺癌细胞生物学功能的影响以及潜在的分子生物学机制,以判断Eya2是否可能作为前列腺癌早期诊断的生物标记物。研究方法:1组织样本98例人类前列腺癌组织和16例前列腺正常组织... 

【文章页数】：104 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分:Eya2在前列腺癌中高表达并促进前列腺癌细胞增殖和侵袭
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 免疫组织化学
            2.1.1 主要仪器及生产商
            2.1.2 主要试剂及生产商
            2.1.3 组织样本
            2.1.4 主要实验步骤
        2.2 细胞培养
            2.2.1 主要仪器及生产商
            2.2.2 主要试剂及生产商
            2.2.3 主要实验步骤
        2.3 Western Blot
            2.3.1 主要仪器及生产商
            2.3.2 主要试剂及生产商
            2.3.3 主要试剂配方
            2.3.4 主要实验步骤
        2.4 细胞转染与干扰
            2.4.1 主要仪器及生产商
            2.4.2 主要试剂及生产商
            2.4.3 主要实验步骤
        2.5 实时荧光定量PCR
            2.5.1 主要仪器及生产商
            2.5.2 主要试剂及生产商
            2.5.3 主要实验步骤
        2.6 CCK-8和集落形成实验
            2.6.1 仪器及生产商
            2.6.2 主要试剂及生产商
            2.6.3 主要实验步骤
        2.7 TRANSWELL细胞侵袭实验
            2.7.1 主要仪器及生产商
            2.7.2 主要试剂及生产商
            2.7.3 主要实验步骤
        2.8 统计分析
    3 结果
        3.1 Eya2在前列腺癌组织中高表达
        3.2 Eya2在前列腺癌组织中的表达与临床病理因素的关系
        3.3 Eya2在前列腺癌细胞中高表达
        3.4 Eya2促进前列腺癌细胞增殖
        3.5 Eya2促进前列腺癌细胞侵袭
    4 讨论
    5 结论
第二部分:Eya2调控前列腺癌细胞线粒体功能及多西紫杉醇化疗敏感性
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 细胞培养
            2.1.1 主要仪器及生产商
            2.1.2 主要试剂及生产商
            2.1.3 主要实验步骤
        2.2 细胞转染与干扰
            2.2.1 主要仪器及生产商
            2.2.2 主要试剂及生产商
            2.2.3 主要实验步骤
        2.3 western blot
            2.3.1 主要仪器及生产商
            2.3.2 主要试剂及生产商
            2.3.3 主要试剂配方
            2.3.4 主要实验步骤
        2.4 CCK-8和集落形成实验
            2.4.1 仪器及生产商
            2.4.2 主要试剂及生产商
            2.4.3 主要实验步骤
        2.5 细胞凋亡实验
            2.5.1 仪器及生产商
            2.5.2 主要试剂及生产商
            2.5.3 主要实验步骤
        2.6 线粒体膜电位JC-1实验
            2.6.1 仪器及生产商
            2.6.2 主要试剂及生产商
            2.6.3 主要实验步骤
        2.7 统计方法
    3 结果
        3.1 Eya2降低前列腺癌细胞对多西紫杉醇的化疗敏感性
        3.2 Eya2抑制多西紫杉醇诱导的细胞凋亡
        3.3 Eya2抑制凋亡相关蛋白的降解
        3.4 Eya2促进线粒体膜电位上升
    4 讨论
    5 结论
第三部分:Eya2 通过AKT/Bcl-2 通路调节前列腺癌细胞生物学功能
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 细胞培养
            2.1.1 主要仪器及生产商
            2.1.2 主要试剂及生产商
            2.1.3 主要实验步骤
        2.2 细胞转染与干扰
            2.2.1 主要仪器及生产商
            2.2.2 主要试剂及生产商
            2.2.3 主要实验步骤
        2.3 western blot
            2.3.1 主要仪器及生产商
            2.3.2 主要试剂及生产商
            2.3.3 主要试剂配方
            2.3.4 主要实验步骤
        2.4 实时荧光定量PCR
            2.4.1 主要仪器及生产商
            2.4.2 主要试剂及生产商
            2.4.3 主要实验步骤
        2.5 统计分析
    3 结果
        3.1 Eya2 促进AKT磷酸化并上调Bcl-2 以及MMP7 表达
        3.2 前列腺癌中Eya2与Bcl-2及MMP7 表达显著相关
        3.3 Eya2 激活前列腺癌细胞中AKT/Bcl-2 信号通路
    4 讨论
    5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]前列腺癌骨转移的预测因素[J]. 陈业辉,聂品,江文,赵仕佳,仉智,林华欣,李淼沅,刘燕青,李鹏麾,朱旭生.  南方医科大学学报. 2016(02)
[2]PI3K-Akt信号通路与肿瘤细胞凋亡关系的研究进展[J]. 黄秀兰,崔国辉,周克元.  癌症. 2008(03)



本文编号：3677494