组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶LSD1在巨噬细胞免疫特性转换中的调控作用及相关机制研究

发布时间：2022-08-23 15:42

　　巨噬细胞存在于大多数组织中,维持着机体免疫内环境的稳态。当巨噬细胞所处微环境改变时,其表型和功能也会发生相应的改变,被称为巨噬细胞的可塑性。而表观遗传是调控巨噬细胞可塑性的关键因素之一。近年来,越来越多证据证明表观遗传可调控巨噬细胞基因表达进而调节免疫反应。其中,据报道组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶LSD1不仅可调控造血干细胞（HSC）分化,肿瘤上皮间质转化（EMT）,还可调节肿瘤免疫原性,参与B细胞生成。但其在巨噬细胞免疫特性转换中的作用尚不清楚,基于LSD1在免疫调控中的潜能,本课题将深入探究LSD1对巨噬细胞免疫特性转换的影响。在该研究中,我们首先采用体外诱导的方式,将人单核细胞分化为静息状态的M0型巨噬细胞,并将M0进一步诱导为经典活化的M1型巨噬细胞和替代活化的M2型巨噬细胞,用于模拟体内具有不同免疫调节功能的巨噬细胞。为了探究LSD1是否在巨噬细胞免疫特性转换过程中发挥调控作用,我们分别从抑制LSD1酶活性和干扰LSD1基因表达两方面入手,通过运用流式细胞术、ELISA、Western Blot、荧光定量PCR等技术,分析巨噬细胞形态学、表面标志物（Markers）、细胞因子... 

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略词
第一章 前言
    1.1 巨噬细胞来源功能及其可塑性
        1.1.1 巨噬细胞来源及异质性
        1.1.2 巨噬细胞功能
        1.1.3 巨噬细胞可塑性
    1.2 表观遗传与巨噬细胞
        1.2.1 表观遗传影响基因的表达
        1.2.2 表观遗传调控巨噬细胞表型及功能转换
        1.2.3 表观遗传酶LSD1与免疫
    1.3 本文的主要研究目的和意义
    参考文献
第二章 实验材料与方法
    2.1 常见溶液的配制
    2.2 细胞培养
        2.2.1 悬浮细胞THP1培养
        2.2.2 贴壁细胞培养
        2.2.3 细胞冻存
        2.2.4 细胞复苏
    2.3 细胞计数
    2.4 巨噬细胞及其极化状态模型的构建
    2.5 细胞转染及稳转株筛选
    2.6 Real-Time PCR及荧光定量PCR
        2.6.1 RNA提取
        2.6.2 RNA反转录
        2.6.3 荧光定量PCR
    2.7 巨噬细胞表型鉴别
    2.8 巨噬细胞吞噬功能检测
    2.9 酶联免疫吸附实验
    2.10 细胞全蛋白提取
    2.11 酸沉淀法提取细胞组蛋白
    2.12 BCA蛋白定量
    2.13 Western Blotting实验
    2.14 细胞活性检测
    2.15 肿瘤相关巨噬细胞模型构建
    2.16 T细胞增殖实验
    2.17 共培养增殖实验
    2.18 Transwell实验
    2.19 数据分析
第三章 实验结果与讨论
    3.1 LSD1参与巨噬细胞分化和极化
        3.1.1 巨噬细胞模型构建与验证
        3.1.2 经典活化的M1型巨噬细胞模型构建及验证
        3.1.3 替代活化的M2型巨噬细胞模型构建及验证
        3.1.4 LSD1在不同极化状态下巨噬细胞显著高表达
    3.2 LSD1对M0型巨噬细胞免疫特性转换的调控作用
        3.2.1 抑制LSD1酶活性对M0型巨噬细胞免疫特性的影响
        3.2.2 干扰LSD1表达对M0型巨噬细胞免疫特性转换的影响
    3.3 抑制巨噬细胞中LSD1可增强其免疫监察功能
        3.3.1 抑制LDS1可增强M1型巨噬细胞功能
        3.3.2 抑制LSD1可促M2型巨噬细胞向经典活化的方向极化
        3.3.3 抑制LSD1后肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)促肿瘤功能的变化
    3.4 巨噬细胞中LSD1调控其免疫特性转换的机制探索
    3.5 讨论
参考文献
个人简历
致谢



本文编号：3678039