套细胞淋巴瘤恶性克隆的生物学特性

发布时间：2022-09-17 12:02

　　目前的细胞株生物学特性与临床标本不符,临床标本细胞成分复杂、正常与异常细胞共存,以上已成为制约套细胞淋巴瘤（mantle cell lymphoma,MCL）发病机制研究的瓶颈。既往研究认为MCL来源于CD19阳性（CD19+）的成熟B细胞,而近期少许研究提示CD19阴性（CD19-）细胞可能是MCL的起源细胞,均预示MCL发病机制的复杂性。MCL恶性克隆发病机制研究严重不足,成为基础与临床研究急需解决的重要问题,导致这一问题的关键因素是优良细胞模型的匮乏。因此建立生物学特性与临床高度吻合的细胞株,将为打破发病机制研究实验瓶颈,为进一步研究其发病机制提供可能。目的1建立包含CD19+并极大富集CD19-早期阶段细胞,且生物学特性与临床高度吻合的MCL恶性克隆细胞株。2利用新建立的细胞模型进行MCL恶性克隆发病机制的研究,重点关注:MCL是单克隆还是多克隆肿瘤;恶性克隆生物学特性:聚焦异常发育阶段,免疫表型,基因表达、体内外肿瘤生物学特性。方法1 Je Ko-1-spheres细胞株的建立（1）球形生长方式的鉴定:流式检测比较Je Ko-1-parental细胞株球形生长及单个悬浮两种不... 

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【学位级别】：博士

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符号说明
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 材料和方法
    第一章 材料
        1.1 细胞
        1.2 临床标本
        1.3 实验动物
        1.4 主要仪器设备
        1.5 主要试剂
    第二章 方法
        1.1 JeKo-1-parental及Jeko-1-spheres细胞株培养
            1.1.1 培养条件
            1.1.2 传代
            1.1.3 JeKo-1-parental及Jeko-1-spheres细胞株的冻存
            1.1.4 细胞复苏
            1.1.5 胎盘蓝细胞活性检测
        1.2 临床标本的培养
            1.2.1 纳入标准
            1.2.2 排除标准
            1.2.3 采集
            1.2.4 单个核细胞的制备
                1.2.4.1 外周血分离PBMC
                1.2.4.2 骨髓液分离BMMNC
            1.2.5 冻存
            1.2.6 复苏
            1.2.7 培养
        1.3 流式细胞分析
        1.4 边群细胞分析
        1.5 流式分选
            1.5.1 细胞株分选方案
            1.5.2 PBMC和BMMNC分选方案
            1.5.3 标本准备
            1.5.4 细胞分选
        1.6 总RNA提取和qrt-PCR
            1.6.1 总RNA提取
            1.6.2 RNA完整性、纯度检测及浓度测定
            1.6.3 总RNA的逆转录
            1.6.4 PCR引物
            1.6.5 qrt-PCR
        1.7 甲基纤维素克隆成球实验
            1.7.1 细胞株实验
            1.7.2 细胞株CD19/IgM细胞亚群实验
            1.7.3 临床标本单个核细胞CD19/IgM细胞亚群实验
        1.8 NOD/SCID体内成瘤实验
            1.8.1 细胞株体内实验
            1.8.2 细胞株分选CD19/IgM细胞亚群体内实验
            1.8.3 临床标本pt4分选CD19/IgM细胞亚群体内实验
        1.9 免疫组织化学染色
            1.9.1 试剂配制
            1.9.2 试验方法
第二部分 结果
    第一章 JeKo-1-parental及JeKo-1-spheres细胞株不同生长方式的鉴定
        1.1 镜下观察结果
        1.2 CD19在JeKo-1-parental、JeKo-1-spheres及原代标本中的表达
        1.3 JeKo-1-parental由单个悬浮细胞转变为不规则多细胞球体时镜下观察结果
        1.4 JeKo-1-parental不同生长方式及JeKo-1-spheres细胞活性的测定
        1.5 JeKo-1-parental及JeKo-1-spheres细胞株边群细胞的测定..
        1.6 JeKo-1-spheres细胞株与临床原代细胞体外生长方式的比较..
    第二章 JeKo-1-spheres细胞株的生物学特性
        1.1 JeKo-1-spheres细胞株免疫表型鉴定
        1.2 根据JeKo-1-spheres细胞株免疫表型结果确定异常分化发育阶段
        1.3 Qrt-PCR实验检测Jeko-1-spheres细胞株的基因表达
        1.4 Jeko-1-spheres细胞株甲基纤维素克隆成球实验结果
        1.5 Jeko-1-spheres细胞株体内成瘤能力
    第三章 CD19/IgM细胞亚群在临床标本中的表达
    第四章 CD19/IgM亚群生物学特性的鉴定
        1.1 健康供者CD19/IgM细胞亚群体外克隆成球能力的鉴定
        1.2 JeKo-1-spheres细胞株中CD19/IgM细胞亚群体外克隆成球能力的鉴定
        1.3 病人标本中CD19/IgM细胞亚群体外克隆成球能力的鉴定
        1.4 Jeko-1-spheres细胞株CD19/IgM细胞亚群体内肿瘤生物学特性的鉴定
        1.5 临床标本pt4中CD19/IgM细胞亚群体内肿瘤生物学特性的鉴定
第三部分 讨论
    第一章 多细胞球体生长状态是MCL早期阶段恶性克隆细胞的独特生长方式
    第二章 Jeko-1-spheres细胞株的生物学特性
    第三章 CD19-/IgM-、CD19-/IgM+、CD19+/IgM+三个亚克隆在MCL恶性克隆发病机制中的作用
全文总结
参考文献
文献综述
    参考文献
致谢
博士期间发表的论文



本文编号：3679189