环状RNA circZMYM4在肺癌中的作用及机制研究

发布时间：2022-10-11 18:28

　　目的环状RNA（circular RNA,circRNA）是一种特殊的内源性非编码RNA（non-coding RNA,ncRNAs）。多项研究均表明,大量的环状RNA在肺癌（Lung Cancer,LC）中表达失调并影响病情的进展和预后。但是,环状RNA在肺癌中的分子机制还未得到明确阐明。本文通过对芯片测序的结果进行生物信息学分析、选取特定的环状RNA（circZMYM4）分子,旨在探究circZMYM4在肺癌中的作用,明确circZMYM4的生物学功能及影响肺癌的分子机制,从而为肺癌的预后提供分子标志物,甚至为肺癌的治疗提供潜在的干预靶点。方法（1）筛选并鉴定与肺癌相关的circRNA:从公共数据库的组织芯片中寻找和筛选在肺癌和癌旁组织中有显著差异表达的环状RNA（circZMYM4）。通过特异性反向引物进行逆转录PCR（reverse transcription PCR,RT-PCR）、琼脂糖凝胶电泳、Sanger测序及核酸外切酶（RNase R）耐受实验,对circZMYM4的环状结构、成环位点及稳定性进行检测。通过实时荧光定量PCR（real-time quantitativ... 

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
引言
材料与方法
1 材料
    1.1 实验仪器
    1.2 实验耗材与试剂
    1.3 实验细胞
    1.4 实验动物
    1.5 组织芯片
    1.6 临床肺癌组织样本
2 实验方法
    2.1 生物信息学数据的获得与分析
    2.2 基本分子实验
        2.2.1 RNA的提取
        2.2.2 逆转录cDNA实验
        2.2.3 PCR实验
        2.2.4 实时荧光定量PCR实验
        2.2.5 琼脂糖凝胶电泳
        2.2.6 Sanger测序
        2.2.7 蛋白提取
        2.2.8 测定蛋白浓度
        2.2.9 Western Blot
        2.2.10 siRNA、过表达载体及过表达稳转细胞株的构建
    2.3 细胞实验
        2.3.1 细胞培养
        2.3.2 细胞转染
    2.4 特殊功能及机制实验
        2.4.1 RNase R实验
        2.4.2 荧光原位杂交(Fish)实验
        2.4.3 MTT实验
        2.4.4 EdU实验
        2.4.5 Transwell实验
        2.4.6 RNA Pulldown实验
        2.4.7 RNA-IP实验
        2.4.8 免疫荧光实验
    2.5 动物实验
        2.5.1 裸鼠皮下荷瘤实验
    2.6 统计学分析
结果
    1 确定研究目标为circZMYM4
    2 circZMYM4 的鉴定
    3 circZMYM4 在肺癌中表达水平显著降低
    4 circZMYM4 的定位
    5 过表达circZMYM4 抑制肺癌细胞生长
    6 circZMYM4 可以和YBX1 蛋白结合
    7 circZMYM4 可通过阻止YBX1 的入核抑制肺癌的发展
讨论
结论
参考文献
综述
    综述参考文献
攻读学位期间的研究成果
缩略词表
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]环状RNA UBAP2沉默对肺癌A549细胞体外增殖和侵袭的影响及机制[J]. 殷玉敬,高辉,郭佳,高洋.  中国肺癌杂志. 2017(12)
[2]环状RNA CircHIPK3通过miR-379调控IGF1表达促进非小细胞肺癌细胞系NCI-H1299与NCI-H2170的细胞增殖[J]. 田芳,王云,肖哲,朱学军.  中国肺癌杂志. 2017(07)
[3]Cancer statistics: updated cancer burden in China[J]. Wanqing Chen.  Chinese Journal of Cancer Research. 2015(01)



本文编号：3691071