低剂量纳曲酮（LDN）抑制结直肠癌的恶性生物学行为及其机制研究

发布时间：2022-11-04 21:18

　　目的:结直肠癌是位于全球肿瘤发病率第三位的恶性肿瘤,也是导致肿瘤患者死亡的第四大癌种。结直肠癌发病率在逐年升高,预计到2035年该病的发病率是现在的一倍。目前,外科手术仍然是治疗结直肠癌的主要手段,化疗是辅助手段。随着药物研究的进展,靶向治疗药物如抗血管内皮生长因子抗体以及表皮生长因子抗体已经被美国食品及药品管理局（FDA）批准用于治疗转移性结直肠癌,但靶向治疗往往存在局限性,比如有的药物需要在治疗前进行基因检测,以及普遍有费用高、疗程长的缺点。PD-1单抗和CTL-A4抑制剂的联合治疗,也显示出疗效,但只在基因微卫星不稳定的患者中效果明显。纳曲酮（naltrexone,NTX）又称为盐酸纳曲酮,最早由美国杜邦公司1963年研发,并于1984年通过FDA的审查、上市,主要用于阿片药物成瘾、酒精依赖和毒品戒断等方面的治疗,常用剂量为50-100mg/d,而低于5mg/d的剂量,称为低剂量纳曲酮（low dose naltrexone,LDN）。研究发现,当应用LDN时,可以缓解免疫相关性疾病如多发性硬化、炎症性肌纤维痛、克罗恩病等的症状,并且在多种肿瘤细胞系中抑制其生长。LDN与化疗药物... 

【文章页数】：86 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 :LDN体外抑制人结直肠癌细胞的恶性生物学行为
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 材料与试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 试剂
            2.2.2 细胞培养
            2.2.3 分组
            2.2.4 CCK-8检测细胞增殖能力
            2.2.5 克隆形成实验
            2.2.6 观察细胞形态
            2.2.7 Hoechst33258 染色检测
            2.2.8 凋亡检测
            2.2.9 RT-PCR检测OGFr、Ki67的m RNA水平
            2.2.10 Western Blot检测OGFr蛋白表达水平
            2.2.11 统计学分析
    3 结果
        3.1 LDN抑制人结直肠癌细胞的增殖
        3.2 LDN对结肠粘膜正常上皮细胞无明显影响
        3.3 LDN对人结直肠癌细胞克隆形成能力的影响
        3.4 LDN对人结直肠癌细胞形态的影响
        3.5 LDN对人结直肠癌细胞凋亡的影响
        3.6 LDN对人结直肠癌OGFr表达的影响
        3.7 LDN对人结直肠癌细胞中Ki67的m RNA表达水平影响
    4 讨论
    5 结论
第二部分 :LDN体内可以抑制结直肠癌的增殖及有可能通过增加M1型巨噬细胞的活性增加抗肿瘤作用
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 细胞系和实验动物
            2.1.2 相关试剂
            2.1.3 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 试剂配制
            2.2.2 细胞培养
            2.2.3 实验分组
            2.2.4 裸鼠结直肠癌皮下移植瘤模型
            2.2.5 HE染色
            2.2.6 免疫组织化学
            2.2.7 统计学分析
    3 结果
        3.1 LDN抑制裸鼠结直肠癌皮下移植瘤的增殖
        3.2 裸鼠结直肠癌皮下移植瘤的病理形态
        3.3 LDN对结直肠癌移植瘤组织中Ki67的表达影响
        3.4 LDN通过增加M1型TAMs活性发挥抑制结直肠癌增殖的作用
    4 讨论
    5 结论
第三部分 :LDN诱导结直肠癌凋亡的机制研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 细胞系
            2.1.2 细胞培养相关试剂
            2.1.3 实验仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 试剂
            2.2.2 细胞培养操作
            2.2.3 RT-PCR检测Bax、Bcl-2、caspase-8、caspase-9、caspase-3、survivin的mRNA水平
            2.2.4 Western Blot检测凋亡相关蛋白表达水平
            2.2.5 统计学分析
    3 结果
        3.1 LDN对人结肠癌细胞中Bax、Bcl-2、caspase-8、caspase-9、caspase-3和survivin的mRNA表达水平的影响
        3.2 LDN对人结直肠癌细胞中凋亡相关蛋白表达的影响
    4 讨论
    5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：3701351