人肺癌细胞中sirtuin1/2调控自噬的分子机制研究

发布时间：2022-11-12 17:25

　　研究目的根据2014年世界卫生组织发表的全球癌症报告,全球癌症患者和死亡病例都在急剧地增加,中国新增癌症病例高居亚洲第一位。癌症已成为人类最主要的致死疾病之一,化学疗法是目前癌症治疗的主要手段,但是化疗副作用及其并发症给肿瘤病人的健康带来了极大的威胁,因此为开发具有高度特异性、更低副作用及更高效的抗肿瘤药物提供新的靶标和新的肿瘤治疗策略显得尤为重要。sirtuins家族蛋白因其与生物体的寿命相关,并且是一类可能的新型抗肿瘤药物靶点近年得到科学家们的广泛关注。哺乳动物sirtuins （SIRT1-7）是一类依赖于NAD+的Ⅲ型组蛋白去乙酰化酶。转录后修饰和表观遗传修饰在调控蛋白活性方面起着重要作用,而蛋白活性的改变可能导致生物体代谢活动的变化,从而引起许多疾病,比如癌症。就目前的研究来看,sirtuins家族的蛋白在调控肿瘤发生中扮演着重要角色。一方面,这类蛋白可能作为肿瘤抑制因子发挥着其生物学功能。另一方面,还有证据证明sirtuins也能促进肿瘤发生。因此,有很多以sirtuins基因为靶点的化合物都涌现出来。在本研究中,我们使用了一种小分子化合物salermide,它是一种sir... 

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【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
符号说明
前言
    1 肺癌
    2 肿瘤与组蛋白去乙酰化酶
    3 去乙酰化酶家族蛋白sirtuins
        3.1 sirtuins与衰老
        3.2 sirtuins与癌症
    4 细胞自噬
        4.1 自噬概述
        4.2 细胞自噬与肿瘤
    5 细胞凋亡
        5.1 凋亡概述
        5.2 细胞凋亡与细胞自噬
    6 内质网应激与细胞凋亡和细胞自噬
        6.1 内质网应激与细胞自噬
        6.2 内质网应激与细胞凋亡
实验材料与方法
    1 实验材料
        1.1 细胞系及细胞培养所需材料
        1.2 实验试剂及抗体
        1.3 siRNA
        1.4 质粒
        1.5 主要实验设备及仪器
        1.6 实验所需主要溶液及试剂配方
    2 实验方法
        2.1 细胞培养
        2.2 转染
        2.3 基因克隆
        2.4 免疫印迹
        2.5 免疫共沉淀
        2.6 流式细胞术检测细胞凋亡
        2.7 统计数据分析
实验结果
    1 salermide诱导人非小细胞肺癌细胞自噬
        1.1 salermide诱导细胞形成自噬小体
        1.2 salermide上调细胞中MAP1LC3B蛋白表达
        1.3 salermide诱导细胞形成自噬流
    2 抑制SIRT1/2促进细胞自噬
        2.1 敲低SIRT1/2诱导细胞形成自噬小体
        2.2 敲低SIRT/2上调细胞中MAP1LC3B蛋白的表达
    3 抑制SIRT1/2抑制MTOR并上调ATF4、DDIT4
        3.1 salermide抑制MTOR信号通路并上调ATF4、DDIT4
        3.2 敲低SIRT1/2抑制MTOR信号通路并上调ATF4、DDIT4
    4 抑制SIRT1/2通过ATF4-DDIT4-MTOR信号通路诱导自噬
        4.1 敲低ATF4后抑制DDIT4的表达
        4.2 敲低DDIT4后恢复了MTOR信号通路
        4.3 过表达DDIT4促进MAP1LC3B的表达
        4.4 敲低ATF4后抑制DDIT4并恢复MTOR信号通路
        4.5 敲低ATF4和DDIT4后抑制了自噬小体的形成
    5 抑制SIRT1/2使HSPA5乙酰化并与EIF2AK3解离
        5.1 抑制SIRT1/2使HSPA5与EIF2AK3解离
        5.2 抑制SIRT1/2使HSPA5乙酰化程度升高
    6 HSPA5与SIRT1/2相互作用的结构域
        6.1 HSPA5、SIRT1和SIRT2的结构域
        6.2 HSPA5与SIRT1相互作用的结构域
        6.3 HSPA5与SIRT2相互作用的结构域
    7 抑制SLM诱导的细胞自噬促进细胞凋亡
        7.1 敲低ATG5上调CASP8、CASP3、PARP1的表达
        7.2 敲低ATG5后凋亡细胞比例增加
讨论
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]Autophagy and cancer[J]. Si-Zhao Lu,Duygu Dee Harrison-Findik.  World Journal of Biological Chemistry. 2013(03)
[2]植物程序性细胞死亡检测技术[J]. 徐昌杰,陈昆松,Hong Ding,IonaE.Weir,IanB.Ferguson.  遗传. 2004(01)



本文编号：3706776