辛酸影响骨髓腔中脂肪细胞与成骨细胞构成比促进前列腺癌骨转移的作用及机制研究

发布时间：2022-12-05 22:23

　　目的本研究在构建肥胖伴骨髓腔前列腺癌（Prostate Cancer,PCa）荷瘤裸鼠模型的基础上,明确肥胖状态下游离脂肪酸（Free Fatty Acid,FFA）含量增加,是否会引起骨髓微环境改变（脂肪细胞增多,增加环氧合酶2（Cyclooxygenase 2,COX2）的表达,成骨细胞减少,降低骨保护素（Osteoprotegerin,OPG）的表达）,是否会促进PCa细胞在骨髓腔中的生长和定殖,并明确二者的相关性;在体外培养人源骨髓间充质干细胞（human Marrow Mesenchymal Stem Cells,h MSCs）的基础上,明确高浓度FFA（辛酸）对h MSCs向脂肪细胞、成骨细胞分化的影响,以及对分化关键因子表达的影响;将辛酸（FFA C8:0）联合诱导剂诱导分化成熟的脂肪细胞、成骨细胞分别与人前列腺癌细胞PC3及22RV1间接共培养,明确辛酸（FFA C8:0）对PCa细胞生物学行为的影响。通过以上研究,尝试阐明肥胖相关PCa发生骨转移的可能分子机制,为临床治疗提供新的分子靶标。方法（1）在石河子大学医学院第一附属医院泌尿外科,采集非癌个体（n=16）前列腺... 

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
实验材料
    1.1 人体血清样本来源及实验动物
    1.2 细胞系
    1.3 相关试剂及仪器
        1.3.1 相关试剂和耗材
        1.3.2 相关仪器
    1.4 各种引物序列表
实验方法
    2.1 PCa患者与非癌个体血清样本采集
        2.1.1 一般资料及血液样本的收集
        2.1.2 血脂及FFA含量检测
    2.2 肥胖伴骨髓腔PCa荷瘤小鼠模型建立及标本采集
    2.3 骨组织免疫组化、HE染色及脂肪细胞、成骨细胞分布观察
        2.3.1 骨组织切片
        2.3.2 骨组织免疫组化
        2.3.3 免疫组织化学结果分析
        2.3.4 骨组织H&E染色
        2.3.5 骨髓腔中脂肪细胞、成骨细胞分布观察
    2.4 细胞培养
        2.4.1 辛酸(FFA C8:0)母液的配置
        2.4.2 成人骨髓间充质干细胞培养
        2.4.3 前列腺癌细胞培养
        2.4.4 细胞复苏及换液
        2.4.5 细胞传代
        2.4.6 细胞的冻存
    2.5 成人骨髓间充质干细胞成脂诱导分化及染色
        2.5.1 脂肪细胞诱导剂
        2.5.2 诱导分化
        2.5.3 油红O染色
    2.6 成人骨髓间充质干细胞成骨诱导分化及染色
        2.6.1 成骨细胞诱导剂
        2.6.2 诱导分化
        2.6.3 茜素红染色
    2.7 细胞RNA提取
    2.8 cDNA合成及逆转录
    2.9 实时定量PCR
    2.10 细胞系的蛋白提取
    2.11 蛋白浓度测定(BCA法)
    2.12 Western Blot
    2.13细胞增殖实验
    2.14细胞迁移实验
    2.15细胞的侵袭实验
    2.16 ELISA
    2.17 统计方法
结果
    3.1 PCa患者血清中FFA含量测定及骨转移特异性相关的FFA筛选
        3.1.1 PCa骨转移患者血清FFA含量显著高于无骨转移患者及非癌个体
        3.1.2 筛选出辛酸(FFA C8:0)在PCa患者血清中显著高表达
    3.2 构建肥胖伴骨髓腔PCa荷瘤裸鼠模型,并检测一般指标
        3.2.1 构建肥胖伴骨髓腔PCa荷瘤裸鼠模型
        3.2.2 活体成像
        3.2.3 裸鼠血脂及FFA水平检测
    3.3 高脂喂养裸鼠骨髓腔中脂肪细胞与成骨细胞分布,及COX2和OPG表达水平检测
        3.3.1 高脂喂养裸鼠骨髓腔中,脂肪细胞分布增多
        3.3.2 高脂喂养裸鼠骨髓腔中,成骨细胞分布减少
        3.3.3 高脂喂养裸鼠骨髓腔中,COX2 高表达
        3.3.4 高脂喂养裸鼠骨髓腔中,OPG低表达
    3.4 辛酸(FFA C8:0)诱导hMSCs细胞,促进脂肪细胞分化、抑制成骨细胞生成
        3.4.1 细胞培养及诱导
        3.4.2 辛酸(FFA C8:0)联合诱导剂诱导hMSCs生成更多的脂肪细胞,促进COX2/PGE2 高表达
        3.4.3 辛酸(FFA C8:0)联合诱导剂诱导hMSCs减少向成骨细胞的分化,OPG表达降低
    3.5 辛酸(FFA C8:0)刺激下脂肪细胞/成骨细胞上清液对PCa细胞生物学行为的影响
        3.5.1 辛酸(FFA C8:0)刺激下脂肪细胞上清液与PCa细胞间接共培养,不促进前列腺癌细胞(PC-3/22RV1)增殖,但可促进PC-3 细胞侵袭和迁移能力
        3.5.2 辛酸(FFA C8:0)刺激下脂肪细胞上清液促进PCa细胞中癌基因表达
        3.5.3 辛酸(FFA C8:0)刺激下成骨细胞上清液与PCa细胞间接共培养,不促进PCa细胞(PC-3/22RV1)的增殖、迁移与侵袭能力
讨论
结论
参考文献
文献综述
    参考文献
致谢
作者简介
导师评阅表


【参考文献】：
期刊论文
[1]前列腺癌骨转移动物模型研究进展[J]. 齐思勇,施明,高江平.  中华临床医师杂志(电子版). 2017(04)
[2]重视终末期肾病患者的心理治疗[J]. 李俊,翁敏,韩冰冰,程传贤.  医学与哲学(临床决策论坛版). 2010(09)
[3]初选阶段知识联盟成员评价与选择模型[J]. 石书玲.  科技进步与对策. 2007(09)



本文编号：3710469