HIF-1α在BCG刺激的巨噬细胞极化及抗肿瘤效应中的作用研究
发布时间：2022-12-18 15:31
肿瘤是临床常见的疾病,可分为良性肿瘤和恶性肿瘤。恶性肿瘤已经成为全球造成人类死亡的主要疾病之一。目前针对恶性肿瘤的治疗方法包括手术治疗、放射治疗、化学治疗、中医中药治疗和生物治疗。BCG在临床膀胱癌和黑色素瘤的治疗中具有明显的效果,但是其作用机理尚未明确。研究结果显示膀胱癌患者在BCG灌注48小时后,尿液中的白细胞明显增多,其中巨噬细胞虽然占的比例不多,但是其增加趋势最为明显。这表明巨噬细胞在BCG抗肿瘤效应中发挥重要作用。巨噬细胞极化及功能与其代谢密切相关,M1型巨噬细胞呈现出比较高的有氧糖酵解水平,而缺氧诱导因子HIF-1α是调控糖酵解的上游转录因子,但是HIF-1α介导的糖酵解是否与BCG刺激巨噬细胞极化及发挥抗肿瘤效应有关还不清楚。为了研究BCG诱导巨噬细胞的抗肿瘤作用及相关机制,本课题通过在体外用BCG刺激小鼠原代骨髓来源的巨噬细胞（BMDM）,检测其极化表型和抗肿瘤功能,并用LysMCre-/+HIF-1αFlox/Flox条件性敲除小鼠的BMDM探究HIF-1α在BCG刺激的巨噬细胞向M1型极化并发挥抗肿瘤效应中的作用及机制。基...
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
abstract
第1章 绪论
1.1 BCG的作用及相关研究进展
1.1.1 BCG在疾病治疗中的作用
1.1.2 BCG对免疫细胞的影响
1.2 巨噬细胞的极化与功能
1.2.1 巨噬细胞的极化
1.2.2 巨噬细胞的功能
1.2.3 巨噬细胞的糖代谢
1.3 糖酵解抑制剂2-DG的作用及相关研究进展
1.3.1 2-DG在疾病治疗中的作用
1.3.2 2-DG对免疫细胞的影响
1.4 HIF-1α与糖酵解
1.4.1 HIF-1α的结构
1.4.2 HIF-1α与糖酵解
课题设计思路
第2章 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 实验对象
2.1.2 实验仪器
2.1.3 实验试剂
2.1.4 其他主要试剂的制备
2.2 实验方法
2.2.1 BMDM诱导方法
2.2.2 流式检测
2.2.3 BMDM细胞实验
2.2.4 总RNA提取及浓度检测
2.2.5 逆转录
2.2.6 RT-qPCR反应
2.2.7 CCK-8 检测
2.2.8 小鼠基因型鉴定
2.2.9 蛋白提取
2.2.10 蛋白浓度测定及样本制备
2.2.11 免疫蛋白印迹
2.2.12 乳酸含量检测
2.2.13 移植瘤接种实验
2.2.14 ELISA检测
2.2.15 统计学分析
第3章 实验结果
3.1 BCG刺激BMDM向 M1 型极化并发挥抗肿瘤作用
3.1.1 C57BL/6鼠BMDM的鉴定
3.1.2 BCG刺激的BMDM向 M1 型极化
3.1.3 BCG刺激的BMDM对 B16-F10及MCA207 具有杀伤作用
3.2 糖酵解抑制剂2-DG抑制BCG刺激的BMDM向 M1 型极化及其抗肿瘤作用
3.2.1 2-DG抑制BMDM分泌乳酸
3.2.2 2-DG抑制BCG刺激BMDM向 M1 型极化
3.2.3 2-DG抑制BCG刺激的BMDM的抗肿瘤作用
3.3 HIF-1α在 BCG刺激的BMDM向 M1 型极化并发挥抗肿瘤效应中的作用
3.3.1 HIF-1α条件性敲除小鼠的鉴定
3.3.2 巨噬细胞中的HIF-1α对其抗肿瘤作用的影响
3.3.3 BCG刺激HIF-1α缺失的BMDM表型鉴定
3.3.4 BCG刺激HIF-1α缺失的BMDM对肿瘤细胞杀伤作用的检测
3.4 HIF-1α调控BCG刺激BMDM向 M1 型极化并发挥抗肿瘤效应的相关机制
3.4.1 2-DG抑制BMDM释放乳酸
3.4.2 2-DG抑制BCG刺激BMDM向 M1 型极化及其抗肿瘤作用
第4章 讨论
第5章 结论
参考文献
作者简介及在校期间所取得的科研成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]中药提取物调控巨噬细胞极化研究进展[J]. 张满,胡旭东,陶艳艳,刘洪亮,刘成海. 中国中医药信息杂志. 2019(11)
[2]法舒地尔调控巨噬细胞极化改善糖尿病小鼠心肌纤维化[J]. 谢发江,蒋松辰,高尚远,李燕,冉茂霞,李家富,冯健. 中国病理生理杂志. 2019(05)
[3]卡介苗（BCG）通过诱导IL-12产生和受体表达促进人NK细胞功能[J]. 周晖,范艳莹,吴长有. 细胞与分子免疫学杂志. 2009(11)
[4]活化巨噬细胞通过接触导致肿瘤细胞凋亡[J]. 张领兵,于乐洋,闫东梅,马威,杜柏榕,朱迅. 中国免疫学杂志. 2007(03)
本文编号：3722304
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【学位级别】：硕士
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中文摘要
abstract
第1章 绪论
1.1 BCG的作用及相关研究进展
1.1.1 BCG在疾病治疗中的作用
1.1.2 BCG对免疫细胞的影响
1.2 巨噬细胞的极化与功能
1.2.1 巨噬细胞的极化
1.2.2 巨噬细胞的功能
1.2.3 巨噬细胞的糖代谢
1.3 糖酵解抑制剂2-DG的作用及相关研究进展
1.3.1 2-DG在疾病治疗中的作用
1.3.2 2-DG对免疫细胞的影响
1.4 HIF-1α与糖酵解
1.4.1 HIF-1α的结构
1.4.2 HIF-1α与糖酵解
课题设计思路
第2章 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 实验对象
2.1.2 实验仪器
2.1.3 实验试剂
2.1.4 其他主要试剂的制备
2.2 实验方法
2.2.1 BMDM诱导方法
2.2.2 流式检测
2.2.3 BMDM细胞实验
2.2.4 总RNA提取及浓度检测
2.2.5 逆转录
2.2.6 RT-qPCR反应
2.2.7 CCK-8 检测
2.2.8 小鼠基因型鉴定
2.2.9 蛋白提取
2.2.10 蛋白浓度测定及样本制备
2.2.11 免疫蛋白印迹
2.2.12 乳酸含量检测
2.2.13 移植瘤接种实验
2.2.14 ELISA检测
2.2.15 统计学分析
第3章 实验结果
3.1 BCG刺激BMDM向 M1 型极化并发挥抗肿瘤作用
3.1.1 C57BL/6鼠BMDM的鉴定
3.1.2 BCG刺激的BMDM向 M1 型极化
3.1.3 BCG刺激的BMDM对 B16-F10及MCA207 具有杀伤作用
3.2 糖酵解抑制剂2-DG抑制BCG刺激的BMDM向 M1 型极化及其抗肿瘤作用
3.2.1 2-DG抑制BMDM分泌乳酸
3.2.2 2-DG抑制BCG刺激BMDM向 M1 型极化
3.2.3 2-DG抑制BCG刺激的BMDM的抗肿瘤作用
3.3 HIF-1α在 BCG刺激的BMDM向 M1 型极化并发挥抗肿瘤效应中的作用
3.3.1 HIF-1α条件性敲除小鼠的鉴定
3.3.2 巨噬细胞中的HIF-1α对其抗肿瘤作用的影响
3.3.3 BCG刺激HIF-1α缺失的BMDM表型鉴定
3.3.4 BCG刺激HIF-1α缺失的BMDM对肿瘤细胞杀伤作用的检测
3.4 HIF-1α调控BCG刺激BMDM向 M1 型极化并发挥抗肿瘤效应的相关机制
3.4.1 2-DG抑制BMDM释放乳酸
3.4.2 2-DG抑制BCG刺激BMDM向 M1 型极化及其抗肿瘤作用
第4章 讨论
第5章 结论
参考文献
作者简介及在校期间所取得的科研成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]中药提取物调控巨噬细胞极化研究进展[J]. 张满,胡旭东,陶艳艳,刘洪亮,刘成海. 中国中医药信息杂志. 2019(11)
[2]法舒地尔调控巨噬细胞极化改善糖尿病小鼠心肌纤维化[J]. 谢发江,蒋松辰,高尚远,李燕,冉茂霞,李家富,冯健. 中国病理生理杂志. 2019(05)
[3]卡介苗（BCG）通过诱导IL-12产生和受体表达促进人NK细胞功能[J]. 周晖,范艳莹,吴长有. 细胞与分子免疫学杂志. 2009(11)
[4]活化巨噬细胞通过接触导致肿瘤细胞凋亡[J]. 张领兵,于乐洋,闫东梅,马威,杜柏榕,朱迅. 中国免疫学杂志. 2007(03)
本文编号：3722304
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zlx/3722304.html
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