锌指蛋白ZFX维持人慢性髓细胞白血病干/祖细胞生长的研究

发布时间：2023-01-31 09:53

　　目的:研究锌指蛋白ZFX在人慢性髓细胞白血病（CML）干/祖细胞中的表达和功能。方法:（1）收集正常供体和CML患者骨髓,密度梯度离心、免疫磁珠富集及流式分选分别得到单个核细胞、CD34+细胞及CD34+静息期细胞,qRT-PCR法检测ZFX表达水平;（2）利用慢病毒载体沉默ZFX表达,通过细胞增殖和集落生成检测ZFX沉默对正常骨髓和CML患者CD34+细胞生长等的影响;（3）伊马替尼（Imatinib mesylate,IM）与靶向ZFX共同处理CML患者CD34+细胞,研究靶向ZFX对药物敏感性的影响;（4）IM处理CML患者CD34+细胞和K562细胞,检测ZFX表达的变化,以探究BCR-ABL如何调控ZFX表达;（5）CML患者CD34+细胞中沉默ZFX表达,microarray分析ZFX沉默所引发的基因表达变化,探讨ZFX的作用机制。结果:（1）ZFX在健康供体CD34+细胞中表达高于成熟细胞,ZFX沉默抑制正常骨髓CD34+细胞的生长;（2）CML患者中ZFX的表达显著高于正常对照细胞;（3）ZFX沉默抑制CML患者CD34+细胞生长;（4）ZFX沉默增强患者CD34+细胞... 

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
引言
材料和方法
    一、实验材料
        1.1 细胞
        1.2 主要试剂
        1.3 主要仪器
    二、实验方法
        1、细胞培养
        2、正常骨髓及慢性髓系白血病患者骨髓造血干/祖细胞分离纯化
        3、质粒扩增
        4、病毒的制备和细胞侵染
        5、细胞增殖实验
        6、集落生成试验（CFC）
        7、细胞凋亡检测
        8、细胞总RNA提取
        9、荧光定量PCR
        10、蛋白免疫印迹实验（Western blot）
        11、免疫荧光染色（Immunofluorescence, IF）
        12、统计学分析
实验结果
    1、ZFX维持正常造血CD34~+细胞的生长
    2、ZFX在CML细胞中较正常对照细胞高表达
    3、ZFX沉默抑制CML患者CD34~+细胞生长
    4、沉默ZFX增强CML患者CD34~+细胞的伊马替尼敏感性
    5、IM处理激活Caspase降解ZFX蛋白
    6、基因芯片分析筛选ZFX调控基因
讨论
参考文献
综述 人类慢性粒细胞白血病发病机制及治疗的研究进展
    参考文献
攻读学位期间公开发表的论文
主要试剂配制
中英文缩略词汇表
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]锌指蛋白ZFX在儿童B系急性淋巴细胞性白血病中的表达及意义[J]. 王卓,梁欢欢,李本尚,黄小航,张婧,王翔,丁丽霞,江华.  中国当代儿科杂志. 2013(07)



本文编号：3733900