MiR-149对胃癌细胞的增殖和凋亡的调控

发布时间：2023-02-18 11:37

　　胃癌是世界上常见的恶性疾病,也是全球癌症死亡的第二大原因。虽然胃癌的诊断程序和治疗策略有所改善,但是胃癌患者依然存在转移、复发、预后不良的危险。因此,研究胃癌发生的分子机制尤为重要。miRNAs是一类长度约20个核苷酸的高度保守的非编码RNA分子,可以特异性结合靶基因mRNA的3’-非翻译区(3’-UTR),使mRNA被降解、翻译抑制。MiR-149作为癌基因或者抑癌基因在多种肿瘤发生发展中起重要作用,但是miR-149在胃癌中的作用机理仍然不清楚。本课题主要研究了 miR-149在胃癌细胞中的作用机理,miR-149对胃癌细胞增殖和凋亡的调控。在胃癌细胞SGC7901中过表达miR-149之后,从细胞中提取mRNA、逆转录、并通过Real-Time PCR检测Akt信号通路下游基因的表达情况。我们发现miR-149可以有效地抑制PHLPP2、Bim、Foxo1、Bid、p21等基因的表达,并且对Bcl-2家族部分基因有显著效果。通过MTT实验、细胞增殖实验我们发现50nMmiR-149可以促进胃癌细胞的增殖,并且转染不同浓度的miR-149对细胞的影响不同。通过细胞划痕实验、细胞迁移...

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
    1.1 胃癌研究进展
        1.1.1 胃癌的概述
        1.1.2 与胃癌相关信号通路的研究
    1.2 MicroRNA相关研究
        1.2.1 MicroRNA概述
        1.2.2 MicroRNA在胃癌中的作用
        1.2.3 MiR-149与肿瘤的研究
    1.3 PHLPP的研究进展
        1.3.1 PHLPP的概述
        1.3.2 MicroRNA对PHLPP2的调控
        1.3.3 PHLPP2在肿瘤中的研究
    1.4 MicroRNA与GPCR的关系
第二章 MiR-149对胃癌细胞SGC7901增殖迁移的研究
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验细胞
        2.1.2 试剂及配制
        2.1.3 仪器及耗材
    2.2 实验步骤
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 细胞的复苏
        2.2.3 细胞冻存
        2.2.4 细胞培养与传代
        2.2.5 细胞转染
        2.2.6 细胞中microRNA的提取
        2.2.7 cDNA的合成
        2.2.8 microRNA的定量分析
        2.2.9 细胞中RNA的提取
        2.2.10 cDNA的合成
        2.2.11 实时荧光定量PCR
        2.2.12 MTT实验
        2.2.13 细胞增殖实验
        2.2.14 细胞划痕实验
        2.2.15 细胞迁移实验
    2.3 实验结果
        2.3.1 胃癌细胞SGC7901中miR-149的表达量
        2.3.2 过表达miR-149检测目的基因的表达
        2.3.3 MiR-149对胃癌细胞增殖的影响
        2.3.4 MiR-149对胃癌细胞迁移的影响
    2.4 结果与讨论
第三章 MiR-149在胃癌细胞中靶向调控PHLPP2
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验细胞
        3.1.2 试剂及配制
        3.1.3 仪器及耗材
    3.2 实验步骤
        3.2.1 重组质粒的构建
        3.2.2 质粒突变
        3.2.3 双荧光素酶报告实验
    3.3 实验结果
        3.3.1 MiR-149靶基因的预测
        3.3.2 报告基因载体质粒的制备
        3.3.3 质粒突变
        3.3.4 双荧光素酶报告实验
    3.4 结果与讨论
第四章 MiR-149对胃癌细胞内Akt磷酸化活性的影响
    4.1 实验材料
        4.1.1 实验细胞
        4.1.2 试剂及配制
        4.1.3 仪器及耗材
    4.2 实验步骤
        4.2.1 细胞中蛋白的提取
        4.2.2 测定蛋白浓度
    4.3 实验结果
        4.3.1 MiR-149促进Akt的磷酸化
        4.3.2 MiR-149促进TNF-α诱导的Akt磷酸化活化
        4.3.3 MiR-149能够促进被LY294002抑制的Akt磷酸化活化
    4.4 结果与讨论
第五章 结论与展望
参考文献
附录
致谢
作者及导师简介
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本文编号：3744886