EVs介导的乳腺癌细胞与HUVEC相互作用机制研究
发布时间：2023-03-04 22:51
目的:通过体外实验证实乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞源胞外囊泡(Extracellular Vesicles,EVs)对人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)生物学特性的影响,以及HUVEC源性EVs对MDA-MB-231和MCF-7细胞生物学特性的影响,探讨两种细胞间的相互作用关系,以期说明血管内皮细胞参与肿瘤进程的可能作用机制,并为乳腺癌的治疗提供新的策略和思路。方法:(1)采用差速超速离心法分离乳腺癌细胞源EVs,透射电镜观察乳腺癌细胞源EVs形态;Nanosight检测乳腺癌细胞源EVs的粒径分布;Western blot检测乳腺癌细胞源EVs表面蛋白CD9、CD63的表达情况。(2)免疫荧光观察乳腺癌细胞源EVs被HUVEC内化过程。(3)通过MTT法和平板克隆实验检测乳腺癌细胞源EVs对HUVEC的增殖影响,观察不同浓度乳腺癌细胞源EVs处理后HUVEC的形态学变化;通过划痕实验和Transwell实验检测乳腺癌细胞源EVs对HUVEC迁移作用;通过成管实验检测乳腺癌细胞源EVs对HUVEC的成...
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
英文缩略词中英文注释表
第一章 绪论
1.1.乳腺癌
1.2.血管内皮细胞
1.2.1.血管内皮细胞
1.2.2.人脐静脉内皮细胞
1.2.3.血管生成与肿瘤
1.3.胞外囊泡
1.3.1.胞外囊泡的定义和形成
1.3.2.胞外囊泡的分离方法
1.3.3.胞外囊泡与血管生成
1.3.4.胞外囊泡与肿瘤
1.3.5.胞外囊泡的治疗潜力
第二章 研究目的、方法、方案及意义
2.1.研究目的
2.2.研究方法和内容
2.2.1.乳腺癌细胞源EVs的分离和鉴定
2.2.2.乳腺癌细胞源EVs对 HUVEC生物学特性的影响
2.2.3.HUVEC-EVs对乳腺癌细胞生物学特性的影响
2.3.研究意义
第三章 乳腺癌细胞源EVs的分离和鉴定
3.1.试剂材料与仪器
3.1.1.实验细胞
3.1.2.实验试剂和耗材
3.1.3.实验仪器
3.2.相关溶液的配制
3.2.1.H-DMEM营养液(1000 ml)
3.2.2.双抗的配制
3.2.3.0.25%胰酶的配制(1000 ml)
3.2.4.PBS的配制(1000 ml)
3.2.5.冻存液的配制(10 ml)
3.3.实验方法
3.3.1.细胞的传代培养
3.3.2.细胞的冻存与复苏
3.3.3.细胞上清液的制备
3.3.4.乳腺癌细胞源EVs的分离
3.3.5.乳腺癌细胞源EVs的鉴定
3.3.5.1.透射电镜观察乳腺癌细胞源EVs形态特征
3.3.5.2.NTA粒径分析检测乳腺癌细胞源EVs大小
3.3.5.3 Western blot检测乳腺癌细胞源EVs标志蛋白
3.4.实验结果
3.4.1.乳腺癌细胞源EVs的形态学特征
3.4.2.粒径分析检测乳腺癌细胞源EVs大小
3.4.3.Western blot检测乳腺癌细胞源EVs表面标志蛋白
3.5.讨论
第四章 乳腺癌细胞源EVs对HUVEC生物学特性的影响
4.1.试剂材料与仪器
4.1.1.实验细胞
4.1.2.实验试剂和耗材
4.1.3.实验仪器
4.2.相关溶液的配制
4.2.1.MTT的配制
4.2.2.Western blot相关试剂的配制
4.2.3.AG490 抑制剂的配制
4.3.实验方法
4.3.1.乳腺癌细胞源EVs内化检测
4.3.2.MTT实验
4.3.3.平板克隆实验
4.3.4.Transwell迁移实验
4.3.5.划痕实验
4.3.6.成管实验
4.3.7.细胞蛋白的提取
4.3.8.Western blot
4.3.9.统计分析
4.4.实验结果
4.4.1.乳腺癌细胞源EVs内化实验
4.4.2.乳腺癌细胞源EVs对 HUVEC增殖的影响
4.4.3.乳腺癌细胞源EVs对 HUVEC克隆形成能力的影响
4.4.4.乳腺癌细胞源EVs对 HUVEC迁移能力的影响
4.4.5.乳腺癌细胞源EVs对 HUVEC成管能力的影响
4.4.6.乳腺癌细胞源EVs对 HUVEC相关蛋白表达的影响
4.4.7.乳腺癌细胞源EVs对 AG490 抑制剂处理后HUVEC克隆形成的影响
4.4.8.乳腺癌细胞源EVs对 AG490 抑制剂处理后HUVEC迁移能力的影响
4.4.9.乳腺癌细胞源EVs对 AG490 抑制剂处理后HUVEC成管能力的影响
4.4.10.乳腺癌细胞源EVs对 AG490 抑制剂处理后HUVEC相关蛋白表达的影响
4.5.讨论
第五章 HUVEC-EVs对乳腺癌细胞生物学特性的影响
5.1.试剂材料与仪器
5.1.1.实验试剂和耗材
5.1.2.实验仪器
5.2.实验方法
5.2.1.Transwell侵袭实验
5.2.2.统计分析
5.3.实验结果
5.3.1.HUVEC-EVs对乳腺癌细胞增殖的影响
5.3.2.HUVEC-EVs对乳腺癌细胞克隆形成能力的影响
5.3.3.HUVEC-EVs对乳腺癌细胞迁移能力的影响
5.3.4.HUVEC-EVs对乳腺癌细胞侵袭能力的影响
5.3.5.HUVEC-EVs对乳腺癌细胞相关蛋白表达的影响
5.4.讨论
第六章 主要结论与展望
6.1.主要结论
6.2.展望
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的学术论文、获奖及参加会议
一、发表论文情况
二、获奖情况
三、参加会议情况
本文编号：3755168
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
英文缩略词中英文注释表
第一章 绪论
1.1.乳腺癌
1.2.血管内皮细胞
1.2.1.血管内皮细胞
1.2.2.人脐静脉内皮细胞
1.2.3.血管生成与肿瘤
1.3.胞外囊泡
1.3.1.胞外囊泡的定义和形成
1.3.2.胞外囊泡的分离方法
1.3.3.胞外囊泡与血管生成
1.3.4.胞外囊泡与肿瘤
1.3.5.胞外囊泡的治疗潜力
第二章 研究目的、方法、方案及意义
2.1.研究目的
2.2.研究方法和内容
2.2.1.乳腺癌细胞源EVs的分离和鉴定
2.2.2.乳腺癌细胞源EVs对 HUVEC生物学特性的影响
2.2.3.HUVEC-EVs对乳腺癌细胞生物学特性的影响
2.3.研究意义
第三章 乳腺癌细胞源EVs的分离和鉴定
3.1.试剂材料与仪器
3.1.1.实验细胞
3.1.2.实验试剂和耗材
3.1.3.实验仪器
3.2.相关溶液的配制
3.2.1.H-DMEM营养液(1000 ml)
3.2.2.双抗的配制
3.2.3.0.25%胰酶的配制(1000 ml)
3.2.4.PBS的配制(1000 ml)
3.2.5.冻存液的配制(10 ml)
3.3.实验方法
3.3.1.细胞的传代培养
3.3.2.细胞的冻存与复苏
3.3.3.细胞上清液的制备
3.3.4.乳腺癌细胞源EVs的分离
3.3.5.乳腺癌细胞源EVs的鉴定
3.3.5.1.透射电镜观察乳腺癌细胞源EVs形态特征
3.3.5.2.NTA粒径分析检测乳腺癌细胞源EVs大小
3.3.5.3 Western blot检测乳腺癌细胞源EVs标志蛋白
3.4.实验结果
3.4.1.乳腺癌细胞源EVs的形态学特征
3.4.2.粒径分析检测乳腺癌细胞源EVs大小
3.4.3.Western blot检测乳腺癌细胞源EVs表面标志蛋白
3.5.讨论
第四章 乳腺癌细胞源EVs对HUVEC生物学特性的影响
4.1.试剂材料与仪器
4.1.1.实验细胞
4.1.2.实验试剂和耗材
4.1.3.实验仪器
4.2.相关溶液的配制
4.2.1.MTT的配制
4.2.2.Western blot相关试剂的配制
4.2.3.AG490 抑制剂的配制
4.3.实验方法
4.3.1.乳腺癌细胞源EVs内化检测
4.3.2.MTT实验
4.3.3.平板克隆实验
4.3.4.Transwell迁移实验
4.3.5.划痕实验
4.3.6.成管实验
4.3.7.细胞蛋白的提取
4.3.8.Western blot
4.3.9.统计分析
4.4.实验结果
4.4.1.乳腺癌细胞源EVs内化实验
4.4.2.乳腺癌细胞源EVs对 HUVEC增殖的影响
4.4.3.乳腺癌细胞源EVs对 HUVEC克隆形成能力的影响
4.4.4.乳腺癌细胞源EVs对 HUVEC迁移能力的影响
4.4.5.乳腺癌细胞源EVs对 HUVEC成管能力的影响
4.4.6.乳腺癌细胞源EVs对 HUVEC相关蛋白表达的影响
4.4.7.乳腺癌细胞源EVs对 AG490 抑制剂处理后HUVEC克隆形成的影响
4.4.8.乳腺癌细胞源EVs对 AG490 抑制剂处理后HUVEC迁移能力的影响
4.4.9.乳腺癌细胞源EVs对 AG490 抑制剂处理后HUVEC成管能力的影响
4.4.10.乳腺癌细胞源EVs对 AG490 抑制剂处理后HUVEC相关蛋白表达的影响
4.5.讨论
第五章 HUVEC-EVs对乳腺癌细胞生物学特性的影响
5.1.试剂材料与仪器
5.1.1.实验试剂和耗材
5.1.2.实验仪器
5.2.实验方法
5.2.1.Transwell侵袭实验
5.2.2.统计分析
5.3.实验结果
5.3.1.HUVEC-EVs对乳腺癌细胞增殖的影响
5.3.2.HUVEC-EVs对乳腺癌细胞克隆形成能力的影响
5.3.3.HUVEC-EVs对乳腺癌细胞迁移能力的影响
5.3.4.HUVEC-EVs对乳腺癌细胞侵袭能力的影响
5.3.5.HUVEC-EVs对乳腺癌细胞相关蛋白表达的影响
5.4.讨论
第六章 主要结论与展望
6.1.主要结论
6.2.展望
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的学术论文、获奖及参加会议
一、发表论文情况
二、获奖情况
三、参加会议情况
本文编号：3755168
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zlx/3755168.html
