BUB1B通过中心体分离途径引起多发性骨髓瘤增殖机制研究

发布时间：2023-03-05 01:15

　　多发性骨髓瘤(Multiple Myeloma,MM)是一种血液系统恶性浆细胞肿瘤性疾病,其特征为单克隆免疫球蛋白及骨髓浆细胞异常增生,主要在肾脏、心脏及肝脏等器官内累积。多发性骨髓瘤常伴有多发性溶骨性损害、高钙血症、贫血、肾脏损害。随着近些年多发性骨髓瘤的发病率居高不下,治疗MM的新疗法大量涌现,包括一般治疗,造血干细胞移植,放疗和化疗。化疗其中包括(靶向药物如蛋白酶体抑制剂(硼替佐米、卡非佐米)和免疫调节剂等;糖皮质激素如地塞米松、强的松等)。尽管对于MM患者的治疗取得重大进展,但由于恶性肿瘤具有复发、转移、耐药的特性,导致当前阶段MM患者预后不良。因而对于多发性骨髓瘤的研究刻不容缓。本课题前期通过高通量筛选出与MM患者疾病的发生发展存在密切联系的BUB1B基因(BUB1有丝分裂检查点丝/苏氨酸激酶B,BUB1 Mitotic Checkpoint Serine/Threonine Kinase B)。并且通过基因芯片技术、MM患者临床数据以及HOVON数据库等,证实BUB 1B基因与MM患者疾病的发生发展密切联系。因而课题的开展由此进行,首先通过构建BUB1BOE和BUB1BKD...

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
    1. BUB1B基因的介绍
    2. 染色体不稳定性与肿瘤的相关性
    3. 骨髓微环境(环状RNA)与肿瘤的发生发展相关
    4. BUB1B的表达与多发性骨髓瘤患者生存率相关
    5. 本论文研究的思路和内容
        5.1 BUB1B在多发性骨髓瘤细胞株的表型研究
        5.2 BUB1B过表达对染色体不稳定性的影响
        5.3 骨髓微环境分泌的环状RNA对MM细胞表型产生的影响
    6. 本论文的预期结果与意义
第二章 过表达和敲除BUB1B多发性骨髓瘤细胞株的构建
    1. 前言
    2. 材料
        2.1 细胞、试剂与抗体
        2.2 实验器材
    3. 方法
        3.1 细胞培养
        3.2 感受态制备
        3.3 TOP10感受态细胞的转化
        3.4 质粒提取
        3.5 慢病毒包装
        3.6 慢病毒转染
        3.7 蛋白质免疫印迹(Western blot)
    4. 结果和讨论
        4.1 BCA测定蛋白质浓度
        4.2 转染BUB1B细胞株在细胞内的蛋白质表达水平的检测
    5. 小结
第三章 过表达BUB1B促进多发性骨髓瘤细胞株增殖
    1. 前言
    2. 材料
        2.1 细胞、试剂与抗体
        2.2 实验器材
    3. 方法
        3.1 MTT增殖实验
        3.2 流式细胞术检测有丝分裂细胞周期
    4. 结果和讨论
        4.1 过表达/敲低BUB1B对MM细胞增殖的影响
        4.2 过表达/敲低BUB1B对MM细胞周期的影响
    5. 小结
第四章 BUB1B促进MM细胞株染色体不稳定性以及耐药
    1. 前言
    2. 材料
        2.1 细胞、试剂与抗体
        2.2 实验器材
    3. 方法
        3.1 外显子测序
        3.2 吉姆萨染色
        3.3 免疫荧光染色
        3.4 免疫共沉淀实验
    4. 结果和讨论
        4.1 外显子测序结果
        4.2 BUB1B过表达对MM细胞核型的影响
        4.3 BUB1B过表达对MM细胞染色体不稳定性的影响
        4.4 BUB1B过表达对MM细胞株耐药性的影响
        4.5 BUB1B蛋白相互结合的蛋白
    5. 小结
第五章 BUB1B环状RNA34566在MM细胞株具有蛋白翻译能力
    1. 前言
    2. 材料
        2.1 细胞、试剂与抗体
        2.2 实验器材
    3. 方法
        3.1 总RNA提取
        3.2 总RNA完整性检测
        3.3 RNase R酶处理
        3.4 Hiscript Ⅲ RT SuerMix for qPCR(+ gDNA Wiper)
        3.5 RT-PCR
        3.6 qRT-PCR
        3.7 电穿孔实验
        3.8 Western blot实验
        3.9 质谱测序实验
    4. 结果与讨论
        4.1 MM细胞株是否存在内源性BUB1B环状RNA 34566
        4.2 sanger测序验证外源性BUB1B环状RNA 34566是否正确成环
        4.3 Western blot&蛋白质谱验证BUB1B环状RNA 34566具有蛋白质翻译的能力
    5. 小结
第六章 BUB1B环状RNA 34566促进MM细胞的增殖及染色体不稳定性
    1. 前言
    2. 材料
        2.1 细胞、试剂与抗体
        2.2 实验器材
    3. 方法
        3.1 MTT增殖实验
        3.2 吉姆萨染色
        3.3 免疫荧光染色
    4. 结果与讨论
        4.1 BUB1B环状RNA 34566对MM细胞增殖的影响
        4.2 BUB1B环状RNA34566对MM细胞株微核的影响
        4.3 BUB1B环状RNA34566对MM细胞株染色体不稳定性的影响
    5. 小结
全文总结和展望
参考文献
附录
    英文缩略语对照表
综述
    参考文献
攻读硕士学位期间取得的学术成果
致谢



本文编号：3755396