GGI/MDR1 siRNA逆转A549/DDP细胞多药耐药的研究

发布时间：2023-03-23 18:01

　　通过RNA干扰(RNAi)技术靶向耐药性人肺腺癌细胞内的MDR1基因实现多药耐药性的逆转作用。构建聚乙二醇-聚谷氨酸-聚乙烯亚胺(PEG-b-PLG-g-PEIs,GGI)阳离子聚合物载体,通过¹H NMR表征确认结构,动态光散射法测定GGI/si RNA的粒径及电位,并以A549敏感株和A549/DDP耐药株细胞系为模型,采用MTT法考察GGI的细胞毒性,以流式细胞术评价新型聚合物载体GGI递送si RNA的效率和强度,RT-PCR法考察GGI转染A549和A549/DDP(cisplatin)后MDR1 m RNA水平的表达;Western blot法测定A549/DDP细胞中P-gp的表达。同时,以MTT法和Annexin V-FITC/PI双染法考察si RNA干扰后抗肿瘤药物对药物敏感性的变化。结果显示,GGI/si RNA复合物粒径为150²00 nm,电位稳定在16²8 m V。GGI细胞毒性远低于PEI 25K,且具有更高运载si RNA至细胞内的效率,并能极大降低A549/DDP细胞内MDR1 m RN...

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【文章目录】：
材料与方法
    材料
    聚合物GGI的合成
        聚乙二醇-b-谷氨酸苄酯(PEG-b-PBLG)的合成
        聚合物PEG-b-PLG-PEIs(GGI)的合成
    聚合物GGI的1H NMR表征
    GGI/si RNA复合物的制备与粒径电位的测定
    细胞毒性实验
    GGI/FAM-si RNA纳米粒的细胞摄取
    GGI/MDR1 si RNA复合物的细胞转染
    实时定量PCR(RT-PCR)
    Western blot法检测P-gp蛋白的表达
    MDR1 si RNA干扰后对顺铂的敏感性
    Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡
    统计学处理
结果与讨论
    1 聚合物GGI的1H NMR分析
    2 GGI/si RNA复合物的粒径电位
    3 细胞毒性
    4 GGI/MDR1 si RNA复合物对A549和A549/DDP细胞的摄取情况
    5 MDR1 m RNA表达水平
    6 MDR基因干扰后P-gp的表达水平
    7 Annexin V-FITC/PI双染法检测载体对细胞凋亡的影响
    8 MDR1 si RNA干扰后对顺铂的敏感性
        8.1 MTT法考察
        8.2 流式细胞术考察细胞凋亡
            8.2.1 敏感株A549细胞系的凋亡检测
            8.2.2 耐药株A549/DDP细胞系的凋亡检测
结论



本文编号：3768481