靶向COX-2胞内抗体抑制乳腺癌的生长和转移

发布时间：2023-03-24 20:47

　　乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤,其发病率居女性恶性肿瘤的首位。尽管随着早期诊断和综合治疗(包括外科手术、辅助放化疗、内分泌治疗、免疫治疗以及靶向治疗)的开展,在一定程度上获得了较好的治疗效果,但是由于乳腺癌容易产生耐药和高转移的特点,造成乳腺癌容易愈后复发。因此探究更加安全有效地治疗乳腺癌的策略研究,具有重要的科学意义与现实价值。环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)是催化花生四烯酸(Arachidonic acid,AA)生成前列腺素类物质(PGs)的关键限速酶。多项研究表明,COX-2在乳腺癌细胞中过度表达,参与乳腺癌细胞的细胞增殖与凋亡、免疫抑制、诱导生成各种致癌物质、促进血管生成因子的产生导致乳腺癌细胞迁移浸润等,因此COX-2已成为治疗乳腺癌的一个重要潜在靶点。通过基因工程手段使抗体在细胞内表达的胞内抗体技术,能实现靶向干扰和阻断细胞内抗原蛋白的转录、翻译、加工和修饰等过程。因此,本实验室前期成功构建抗COX-2胞内抗体Intra-OX-1。实验研究发现,该胞内抗体能有效的与肝癌细胞内的COX-2结合,抑制肝癌细胞的生长与增殖,促进肝癌细胞的凋亡,具有良好的...

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 乳腺癌治疗现状
    1.2 COX-2与乳腺癌
        1.2.1 COX-2的发现
        1.2.2 COX-2的基本特性
        1.2.3 COX-2与肿瘤
        1.2.4 COX-2与乳腺癌
    1.3 胞内抗体
        1.3.1 胞内抗体的生物学功能
        1.3.2 胞内抗体的应用
    1.4 本论文立题目的与意义
第二章 实验材料和方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞株及质粒
        2.1.2 主要药品及试剂
        2.1.3 引物
        2.1.4 试剂配制
        2.1.5 实验仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 提取去内毒素含抗体的质粒
        2.2.2 乳腺癌细胞的培养
        2.2.3 细胞转染
        2.2.4 RT-PCR实验
        2.2.5 逆转录(RT)反应
        2.2.6 间接免疫荧光实验
        2.2.7 Western blot分析
        2.2.8 集落形成实验
        2.2.9 AnnexinV/PI双染流式细胞术检测分析
        2.2.10 MTT检测法
        2.2.11 划痕实验
        2.2.12 Transwell体外侵袭实验
        2.2.13 实时定量PCR
第三章 实验结果
    3.1 MCF-7细胞中COX-2的表达
    3.2 胞内抗体在乳腺癌MCF-7细胞中的瞬时表达
        3.2.1 RT-PCR检测胞内抗体的表达
        3.2.2 Western-blot检测瞬时转染细胞株内胞内抗体的表达
        3.2.3 间接免疫荧光检测瞬时转染细胞内胞内抗体的表达
    3.3 稳定细胞系的鉴定
    3.4 胞内抗体与内源COX-2的结合
    3.5 Intra-OX-1抑制了MCF-7细胞的生长与增殖
    3.6 Intra-OX-1促进MCF-7细胞的凋亡
    3.7 Intra-OX-1抑制MCF-7细胞迁移
    3.8 Intra-OX-1抑制MCF-7细胞体外侵袭
    3.9 Intra-OX-1对MCF-7细胞相关因子的影响
第四章 讨论
    4.1 以COX-2为靶点的乳腺癌治疗策略
    4.2 靶向COX-2胞内抗体抑瘤效应的可能分子机制
第五章 结论
参考文献
作者简介
攻读硕士期间科研成果
致谢



本文编号：3769822