CtBP1介导肝癌细胞HepG2低氧条件下的迁移

发布时间：2023-03-29 04:33

　　目的:低氧能促进肿瘤的侵袭和迁移。HepG2细胞中转录辅抑制因子CtBP1抑制了上皮细胞黏附分子E-cadherin的表达,促进了细胞的侵袭和迁移;CtBP1是否介导了低氧诱导的肿瘤细胞迁移尚不明确。本研究通过体外细胞培养,观察低氧对人肝癌HepG2细胞迁移能力的影响,及HepG2细胞中CtBP1蛋白及其靶基因上皮细胞黏附分子E-cadherin蛋白表达的改变;并采用siRNA干扰技术,敲低CtBP1的表达,探讨CtBP1是否介导了低氧对肝癌细胞迁移的促进作用,为阐明肝细胞肝癌恶性进展的分子机制及靶向治疗提供新的理论依据。方法:Western blot法检测肝癌细胞株HUH7、BEL-7402、BEL-7404、SMMC-7721及HepG2细胞中CtBP1蛋白的表达情况。根据检测结果,我们采用CtBP1表达最高的HepG2细胞,转染CtBP1 siRNA,用于后续实验。本实验共分为两部分:第一部分观察低氧条件下HepG2细胞迁移能力及细胞形态的改变。采用细胞划痕实验检测不同缺氧时间(24小时,48小时)对HepG2细胞迁移运动能力的影响、采用免疫荧光法检测低氧对HepG2细胞骨架结构...

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中文摘要
ABSTRACT
英汉缩略词对照表
前言
1 材料与方法
    1.1 实验材料
        1.1.1 细胞株
        1.1.2 主要实验试剂及耗材
            1.1.2.1 细胞培养试剂
            1.1.2.2 细胞转染试剂
            1.1.2.3 分子生物学实验试剂
            1.1.2.4 其他普通试剂及耗材
        1.1.3 所需主要实验试剂的配制
        1.1.4 主要实验仪器
    1.2 实验方法
        1.2.1 细胞培养
            1.2.1.1 人肝癌细胞的复苏
            1.2.1.2 人肝癌细胞的换液
            1.2.1.3 人肝癌细胞的传代
            1.2.1.4 人肝癌细胞的计数和接种
            1.2.1.5 人肝癌细胞的冻存
        1.2.2 建立细胞低氧模型
        1.2.3 人肝癌细胞株HepG2的CtBP1 siRNA(h)转染
            1.2.3.1 最佳干扰浓度的筛选
            1.2.3.2 人肝癌细胞株HepG2的CtBP1 siRNA(h)转染和低氧实验
        1.2.4 Western blot法测低氧条件下转染后HepG2细胞CtBP1和E-cadherin的表达
            1.2.4.1 HepG2细胞总蛋白的提取
            1.2.4.2 BCA蛋白浓度的测定
            1.2.4.3 样品蛋白上样体系的配制
            1.2.4.4 SDS-PAGE凝胶的配制
            1.2.4.5 SDS-PAGE凝胶电泳
            1.2.4.6 蛋白质的湿转法转模
            1.2.4.7 蛋白质的免疫反应
            1.2.4.8 蛋白质的检测
        1.2.5 细胞划痕实验检测低氧条件下转染后HepG2细胞的迁移运动能力
        1.2.6 细胞免疫荧光染色检测低氧条件下转染后HepG2细胞的形态化
        1.2.7 统计学方法
2 结果
    2.1 CtBP1在肝癌细胞中的表达
    2.2 低氧条件下HepG2细胞的迁移运动能力逐渐增强且细胞形态从上皮样多边形转变为间质样梭形
    2.3 低氧作用于HepG2细胞使CtBP1表达上调而其靶蛋白上皮黏附分子E-cadherin表达下调
    2.4 当CtBP1 siRNAs（h）浓度为0.06pmol/μl时干扰效率最高
    2.5 敲低CtBP1抑制了低氧对HepG2细胞迁移运动能力的促进作用且抑制了低氧条件下间质样细胞形态的改变
    2.6 敲低CtBP1基因部分挽救了低氧对E-cadherin表达的抑制作用
3 讨论
4 结论
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间发表的学术论文目录
致谢



本文编号：3774006