CXCL16/CXCR6趋化因子轴通过活化pERK1/2通路促进乳腺癌发展

发布时间：2023-03-30 00:05

　　我们先前发现CXCL16/CXCR6趋化因子轴激活AKT/mTOR信号可促进前列腺癌发展。多项研究表明CXCL16/CXCR6趋化因子轴也参与其他肿瘤进展,如肝癌,卵巢癌,膀胱癌等。然而,其在乳腺癌侵袭和转移中作用有待进一步研究。在本研究中,通过组织芯片免疫组化染色分析CXCR6在乳腺癌和正常乳腺组织芯片中的表达,发现CXCR6在乳腺癌组织中的表达高于正常乳腺组织,且在转移性淋巴结中的表达也明显高于正常淋巴结,提示CXCR6可能参与了乳腺癌的转移。流式细胞术分析CXCR6在多种乳腺癌细胞系和正常乳腺上皮细胞系HBL100中的表达,发现CXCR6在乳腺癌细胞系中的表达阳性率高于正常乳腺上皮细胞系HBL100,且在高转移性的MDA-231细胞中的阳性率最高。为了揭示CXCR6在乳腺癌细胞侵袭转移过程中的作用,我们利用慢病毒系统构建CXCR6稳定过表达的乳腺癌细胞系;划痕愈合和Transwell细胞侵袭实验表明CXCR6能促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭;在机制研究上,我们发现CXCL16/CXR6趋化因子轴并不影响乳腺癌细胞的EMT进程,但能够显著激活ERK1/2信号通路;敲低CXCR6的表达或...

【文章页数】：103 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
一、绪论
二、材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 主要仪器与设备
        2.1.2 主要试剂、耗材
        2.1.3 实验室自配试剂
    2.2 方法
        2.2.1 质粒构建
        2.2.2 质粒转化
        2.2.3 质粒DNA小量提取
        2.2.4 质粒DNA大量抽提
        2.2.5 琼脂糖凝胶DNA片段回收
        2.2.6 细胞复苏、传代、冻存
        2.2.7 细胞转染
        2.2.8 过表达细胞系构建
        2.2.9 外源细胞因子刺激实验
        2.2.10 划痕愈合实验
        2.2.11 Transwell chamber小室检测细胞侵袭实验-Invasion
        2.2.12 流式细胞术检测细胞周期
        2.2.13 CXCR6基因的稳定敲除-shRNA
        2.2.14 蛋白免疫印迹
        2.2.15 基因表达谱芯片
        2.2.16 Trizol法提取细胞总RNA
        2.2.17 逆转录及Real-time PCR
        2.2.18 免疫荧光染色、鬼笔环肽染色
        2.2.19 GST-pull down实验检测RhoA活性
        2.2.20 点突变试剂盒构建RhoA^N19和RhoA^V14质粒
        2.2.21 小鼠尾静脉注射-活体成像
        2.2.22 苏木素-伊红染色
        2.2.23 免疫组化染色
        2.2.24 统计学分析
三、结果
    3.1 CXCR6在乳腺癌组织和细胞系中的表达
    3.2 CXCR6过表达细胞系的构建
    3.3 CXCR6促进乳腺癌细胞的侵袭转移
    3.4 CXCL16/CXCR6趋化因子轴不影响乳腺癌细胞的EMT进程
    3.5 CXCL16/CXCR6趋化因子轴促进乳腺癌细胞ERK1/2 通路的活化
    3.6 CXCL16/CXCR6趋化因子轴促进乳腺癌细胞迁移依赖于ERK1/2 通路的活化
    3.7 基因芯片分析CXCR6过表达对乳腺癌细胞全基因转录组的调控
    3.8 CXCR6过表达细胞系F-actin聚合增多
    3.9 CXCL16/CXCR6趋化因子轴调控F-actin的聚合依赖于ERK1/2 通路的激活
    3.10 CXCL16/CXCR6趋化因子促进Cofilin，FAK的磷酸化
    3.11 CXCL16/CXCR6趋化因子轴通过激活ERK1/2 促进RhoA/Cofilin通路的活化
    3.12 RhoA的活性状态影响F-actin的形成
    3.13 RhoA的活性状态影响乳腺癌细胞的迁移和侵袭
    3.14 体内实验表明敲低CXCR6的表达能够抑制乳腺癌细胞的肺转移
四、讨论
五、总结
六、参考文献
七、全文缩略词中英文对照表
八、致谢
九、攻读博士学位期间发表的文章



本文编号：3774773