探讨FABD结构域对Bcr/Abl蛋白定位及功能的影响

发布时间：2023-04-01 08:43

　　目的:构建F-actin结合结构域(F-actin binding domain,FABD)缺失腺病毒载体Ad-Bcr/Abl-ΔFABD和野生型Bcr/Abl腺病毒载体Ad-Bcr/Abl,探讨FABD结构域对Bcr/Abl蛋白定位及功能的影响。方法:PCR扩增bcr/abl和bcr/abl-ΔFABD片段,双酶切后克隆至穿梭质粒p Ad Track-CMV,经Ad Easy构建系统获得腺病毒Ad-Bcr/Abl-ΔFABD和Ad-Bcr/Abl,并在HEK293细胞中进行包装。将细胞分为3组,Ad-GFP组、Ad-Bcr/Abl组以及Ad-Bcr/Abl-ΔFABD组,分别加入对应的腺病毒。Western blot验证Bcr/Abl和Bcr/Abl-ΔFABD在293T细胞中的表达水平,间接免疫荧光法检测Bcr/Abl和Bcr/Abl-ΔFABD在293T细胞中的定位。流式细胞术、MTT法分别检测Bcr/Abl和Bcr/Abl-ΔFABD对293T细胞凋亡、增殖的影响。结果:双酶切以及测序验证穿梭质粒构建正确;PacⅠ酶切验证重组腺病毒质粒重组成功;绿色荧光显示重组腺病毒包装成功;...

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【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料与试剂
    1.2 引物设计与合成
    1.3 目的基因的扩增
    1.4 腺病毒穿梭质粒的构建
    1.5 重组腺病毒质粒的构建
    1.6 腺病毒的包装和扩增
    1.7 Bcr/Abl和Bcr/Abl-ΔFABD蛋白的表达验证
    1.8 Bcr/Abl和Bcr/Abl-ΔFABD蛋白的细胞定位
    1.9 流式细胞术检测Bcr/Abl和Bcr/Abl-ΔFABD对293T细胞凋亡的影响
    1.1 0 MTT法检测Bcr/Abl和Bcr/Abl-ΔFABD对293T细胞增殖的影响
    1.1 1 统计学分析
2 结果
    2.1 重组腺病毒质粒p Ad-Bcr/Abl、p Ad-Bcr/Abl-ΔFABD的构建及鉴定
    2.2 重组腺病毒Ad-Bcr/Abl、Ad-Bcr/Abl-ΔFABD的包装、扩增及目的蛋白的鉴定
    2.3 FABD对Bcr/Abl蛋白细胞定位的影响
    2.4 FABD对Bcr/Abl蛋白抗凋亡、促增殖能力的影响
3 讨论



本文编号：3776827