癌症/睾丸抗原PASD1调控IL-6诱导的STAT3激活的分子机制及其在肿瘤发生中的作用

发布时间：2023-04-03 01:50

　　研究表明,慢性炎症与癌症密切相关,而转录因子NF-κB和STAT3是连接炎症和肿瘤发生的两个关键转录因子。在肿瘤微环境中,炎性细胞分泌大量的炎症因子,如TNF-α、IL-6,激活NF-κB和STAT3。激活的NF-κB和STAT3诱导一系列促癌蛋白的表达,促进肿瘤的起始、促进和进展。NF-κB-IL-6-STAT3信号转导已被证实在慢性炎症介导的肿瘤发生中起着重要作用。在正常生理条件下,STAT3的激活在多个层面受到多种机制严格的调控。我们通过大规模系统筛选人源和鼠源共约13000个cDNA表达克隆寻找新的参与调控IL-6-STAT3信号通路的分子,并最终鉴定出能够调节STAT3活性的分子PASD1。PASD1是一个新发现的癌症／睾丸抗原,其生物学功能并不清楚。在我们的研究中,PASD1过量表达特异性激活STAT3并促进IL-6诱导的STAT3的激活；而下调PASD1内源基因的表达则显著抑制IL-6诱导的STAT3激活。接着我们发现,PASD1与STAT3在细胞核里相互作用并调节其磷酸化。PASD1过量表达显著增强IL-6诱导的STAT3磷酸化,而PASD1表达下调则明显抑制IL-6诱...

【文章页数】：114 页

【学位级别】：博士

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摘要
ABSTRACT
1. 前言
    1.1 慢性炎症与肿瘤概述
        1.1.1 慢性炎症和非可控性炎症
        1.1.2 炎症与肿瘤微环境
        1.1.3 NF-κB-IL-6-STAT3在肿瘤发生中的作用
    1.2 JAK-STAT信号转导与调控机制
        1.2.1 JAK-STAT信号通路的发现
        1.2.2 JAK-STAT信号转导机制
            1.2.2.1 Ⅰ型和Ⅱ型细胞因子受体
            1.2.2.2 JAKs概述
                1.2.2.2.1 JAKs的结构
                1.2.2.2.2 JAKs的功能
            1.2.2.3 STATs概述
                1.2.2.3.1 STATs的结构
                1.2.2.3.2 STATs的功能
        1.2.3 JAK-STAT信号转导调控机制
            1.2.3.1 受体水平上的调节
            1.2.3.2 JAKs水平上的调节
                1.2.3.2.1 SOCS家族蛋白
                1.2.3.2.2 蛋白酪氨酸磷酸酶
                1.2.3.2.3 泛素化和ISG化
            1.2.3.3 STATs水平的调控
                1.2.3.3.1 STATs的翻译后修饰调控
                1.2.3.3.2 STATs的泛素化、ISG化和SUMO化修饰
                1.2.3.3.3 PIAS家族蛋白对STATs的调控
                1.2.3.3.4 蛋白酪氨酸磷酸酶
                1.2.3.3.5 STATs的核质穿梭
                1.2.3.3.6 共转录因子/转录因子对STAT的调控
    1.3 癌症/睾丸抗原概述
        1.3.1 癌症/睾丸抗原的发现
        1.3.2 癌症/睾丸抗原的分类
        1.3.3 癌症/睾丸抗原的重新激活机制
        1.3.4 癌症/睾丸抗原的功能
            1.3.4.1 癌症/睾丸抗原在肿瘤中的作用
            1.3.4.2 癌症/睾丸抗原在精子发生过程中的功能
        1.3.5 癌症/睾丸抗原的临床应用
2. 实验材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞、细胞培养和细胞因子
        2.1.2 载体构建所需材料和试剂
        2.1.3 荧光素酶报告基因实验相关材料
        2.1.4 实时荧光定量PCR试剂
        2.1.5 免疫共沉淀以及Western Blot实验相关材料
        2.1.6 克隆形成实验和MTT实验相关材料
        2.1.7 实验所用动物
    2.2 实验方法
        2.2.1 载体构建和质粒提取
        2.2.2 细胞培养和瞬时转染
        2.2.3 荧光素酶报告基因实验
        2.2.4 RT-PCR实验
        2.2.5 免疫共沉淀及Western blot实验
            2.2.5.1 过量表达蛋白免疫共沉淀实验
            2.2.5.2 内源性蛋白免疫共沉淀实验
            2.2.5.3 Western blot实验
        2.2.6 逆转录病毒介导的RNAi稳定细胞系的构建
        2.2.7 MTT实验
        2.2.8 软琼脂培养克隆形成实验
        2.2.9 伤口愈合实验
        2.2.10 裸鼠成瘤实验
        2.2.11 重组蛋白的原核表达和纯化
3. 实验结果与讨论
    3.1 立项依据
    3.2 实验结果
        3.2.1 筛选调控IL-6-STAT3信号通路的候选蛋白
        3.2.2 PASD1的过量表达特异性地激活STAT3信号通路
        3.2.3 PASD1的表达下调抑制IL-6诱导的STAT3信号转导
        3.2.4 PASD1与STAT3相互作用
        3.2.5 PASD1调节STTA3的磷酸化
        3.2.6 PASD1抑制TC45对STAT3的去磷酸化
        3.2.7 PASD1影响肿瘤细胞的增殖、不依赖锚定的生长以及迁移
        3.2.8 PASD1在体内促进肿瘤的生长
    3.3 小结与讨论
4. 研究总结与展望
参考文献
缩略词表
作者简介
发表论文
致谢



本文编号：3780406