Hsp90α抑制参与氧化应激诱导的G2/M期阻滞中Cyclin B1蓄积的机制研究

发布时间：2023-04-07 01:54

　　研究背景热休克蛋白90(Hsp90)是一种高度保守、广泛分布于真核细胞的同型二聚体分子伴侣,其对于维持其客户蛋白的构象成熟与稳定有重要作用,而Hsp90的客户蛋白包括了信号转导分子和细胞周期调控中的关键分子。目前认为,人类的Hsp90包括4种亚型：Hsp90α、Hsp90β、肿瘤坏死因子受体相关蛋白(TRAP)1以及糖相关蛋白(Grp)94。其中Hsp90α易受热诱导,在肿瘤细胞增殖中发挥着重要作用,与生物学行为、肿瘤发生发展及其预后有较密切关系,因此它是本次研究的重点。Hsp90对于细胞周期的正常进程有着十分重要的意义,其中涉及到G2/M期的有周期蛋白依赖性激酶(CDK1)、Myt1、Weel和cyclin B1等。G2/M期阻滞的关键周期蛋白是cyclin B1和CDK1, cyclin B1和CDKl复合体又称有丝分裂促进因子(MPF),该复合体的失活可联合DNA损伤应答反应(DDR)导致细胞周期阻滞。已有研究报道,Hsp90对于cyclin B1在中心体和纺锤体的定位和正确折叠发挥着重要作用。此外,据研究表明,Hsp90抑制剂17-AAG可使细胞阻滞在有丝分裂期并伴随着cycl...

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
前言
    1. 氧化应激与食管癌的角化珠形成
    2. 热休克蛋白90
    3. G2/M期阻滞与cyclin B1
    4. 泛素-蛋白酶体系统
    5. Hsp90与周期蛋白cyclin B1
    6. 本研究的目的和意义
材料与方法
    1. 实验材料
        1.1 主要仪器设备
        1.2 主要试剂及配制
    2 实验方法
        2.1 细胞培养
        2.2 药物处理
        2.3 CCK-8法检测细胞活力
        2.4 流式细胞术
        2.5 Western blotting检测细胞内蛋白表达
        2.6 荧光定量PCR检测cyclin B1 mRNA水平
        2.7 ROS探针法检测细胞内ROS含量
        2.8 蛋白酶体活性的测定
        2.9 免疫共沉淀
        2.10 细胞免疫荧光检测
        2.11 siRNA细胞转染
        2.12 免疫组化
    3. 统计学处理
结果
    1. 用过氧化氢(H₂O₂)建立食管癌细胞TE-1氧化损伤模型
    2. 500μMH₂O₂诱导氧化应激对TE-1细胞周期的影响
    3. 500μMH₂O₂诱导氧化应激对TE-1细胞内可溶性Hsp90α的影响
    4. 500μMH₂O₂诱导氧化应激对TE-1糜蛋白酶活性的影响
    5. Hsp90抑制剂17-DMAG与蛋白酶体抑制剂MG132对TE-1细胞周期的影响
    6. Hsp90抑制剂17-DMAG对TE-1糜蛋白酶活性的影响
    7. cylin B1RNA干扰对H₂O₂导致的cyclin B1蓄积和G2/M期阻滞的影响
    8. Hsp90抑制剂17-DMAG对TE-1细胞内ROS水平的影响
    9. 500μMH₂O₂诱导氧化应激对Hsp90α与cyclin B1相互作用以及对cyclin B1泛素化水平的影响
    10. Hsp90a和cyclin B1在高分化人食管鳞癌组织中不同程度角化状态下的表达特征与相互关系变化
    11. 人食管鳞癌组织中HO-1和磷酸化H2A.X的表达情况
讨论
结论
全文总结
参考文献
中英文缩略词表
攻读硕士学位期间成果
致谢



本文编号：3784852