人源酪蛋白激酶Ⅱ催化亚基的构建及表达纯化

发布时间：2023-04-18 18:41

　　目的:构建人源CK2催化亚基pET-28a(+)-hcsnk2a1和pET-28a(+)-hcsnk2a2重组质粒,并进行原核表达纯化得到高纯度融合蛋白,为进一步开展CK2生理病理机制研究以及CK2作为肿瘤抑制靶点相关抑制剂的筛选和评价提供实验基础。方法:利用合成的人源csnk2a1和csnk2a2目的基因片段,将酶切连接得到的重组质粒经测序验证后,进行大肠杆菌感受态BL21 (DE3)/Transetta (DE3)转化。使用合适浓度IPTG诱导融合蛋白的表达以得到可溶性的融合蛋白,并应用AKTA avant蛋白纯化仪和Ni2+-NTA预装柱进行纯化,蛋白纯度最后经SDS-PAGE胶分离后考马斯亮蓝染色和Western Blot检测鉴定。结果:测序结果表明pET-28a(+)-hcsnk2a1和pET-28a(+)-hcsnk2a2质粒均成功被构建;经转化诱导表达后,成功纯化得到相对分子量为42KD的his-hcsnk2a1和38KD的his-hcsnk2a2目的融合蛋白。结论:首次成功构建得到pET-28a(+)-hcsnk2a1和pET-28a(+)-hcsnk2a2质粒;并表达...

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【文章目录】：
前言
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 p ET-28a(+)-hcsnk2a1/pET-28a(+)-hcsnk2a2质粒的构建
        1.2.2 原核融合蛋白的预表达
        1.2.3 原核融合蛋白的纯化
        1.2.4 His-tag融合蛋白的检测
2 结果
    2.1 pET-28a(+)hcsnk2a1质粒的构建
    2.2 原核融合蛋白的预表达
        2.2.1 pET-28a(+)hcsnk2a1的预表达
        2.2.2 p ET-28a(+)hcsnk2a2的预表达
    2.3 融合蛋白的纯化与检测
        2.3.1 p ET-28a(+)hcsnk2a1的纯化与检测
        2.3.2 pET-28a(+)hcsnk2a2的纯化与检测
3 讨论



本文编号：3792810