幽门螺杆菌诱导的胃癌细胞源性外泌体中差异表达miRNA的筛选及初步鉴定

发布时间：2023-04-26 00:38

　　目的:外泌体(Exosomes)是介导细胞间信息交流的又一新的载体,其介导的细胞间信息传递在免疫反应、炎症和肿瘤等过程中发挥重要作用。本实验拟分离、鉴定幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)诱导的人胃癌SGC-7901细胞源性外泌体,使用miRNA芯片筛选其中差异表达微小RNA(microRNA,miRNA),通过生物信息学分析其潜在的靶基因及可能参与的信号通路,为进一步阐明H.pylori的致癌机制提供新线索。方法:使用H.pylori活菌体外刺激人胃癌SGC-7901细胞24h,以空白处理组为对照,采用超高速离心法和外泌体提取试剂盒提取两组细胞释放的外泌体,并采用透射电子显微镜、纳米粒子跟踪分析和Western-blot蛋白印迹实验进行鉴定;荧光染料PKH67标记外泌体,与THP-1源性巨噬细胞共孵育,共聚焦显微镜下观察巨噬细胞摄入外泌体的情况;采用microRNA基因芯片对两组细胞外泌体中含有的miRNA的表达谱进行差异分析,并采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对其中四个差异表达miRNA进行验证;生物信息学软件mirdbv6和targets...

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摘要
Abstract
中英文对照缩略词表
第1章 绪论
第2章 实验材料
    2.1 主要实验仪器
    2.2 细胞株
    2.3 实验试剂
第3章 实验方法
    3.1 人胃癌SGC-7901细胞的复苏、培养、传代及保存
    3.2 THP-1 细胞复苏、培养及PMA诱导分化
    3.3 H.pylori的复苏、培养及冻存
    3.4 超速离心法分离外泌体
    3.5 SBI Exo Quick-TC试剂盒提取外泌体
    3.6 NTA粒径检测
    3.7 透射电子显微镜观察外泌体形态
    3.8 Western-blot法检测CD63、CD9、TSG101和Calnexin标志蛋白的表达
    3.9 激光共聚焦检测THP-1细胞内吞外泌体
    3.10 基因芯片筛选差异表达miRNA
    3.11 qRT-PCR验证miR-10a-5p、miR-382-5p、miR-520f-3p和miR-3178的表达情况
    3.12 靶基因网络构建
    3.13 数据分析
第4章 实验结果
    4.1 H.pylori诱导的SGC-7901源性外泌体的分离及鉴定
    4.2 PMA诱导的THP-1 巨噬细胞内吞外泌体
    4.3 miRNA芯片扫描
    4.4 外泌体中差异表达miRNA的筛选
    4.5 靶基因预测及GO、KEGG Pathway富集分析
    4.6 miR-10a-5p、 mi R-382-5p、 mi R-520f-3p和 mi R-3178 在Hp-7901-exo中的表达情况
    4.7 miR-10a-5p、miR-382-5p、miR-520f-3p和 mi R-3178 靶基因网络的构建
第5章 讨论
第6章 结论
参考文献
综述
    参考文献
基金项目
硕士在读期间发表的科研成果
致谢



本文编号：3801381