SAMD9L在家族性胃癌中作用的研究

发布时间：2023-04-28 00:33

　　胃癌是全球第三大癌症死亡原因,严重危害人类的生命健康。中国的胃癌病例数量约占全球的50%以上,并且胃癌的发病率和死亡率仍在逐年上升。虽然大多数胃癌病例是散发性的,但仍有约10%的病例表现为家族聚集,其中仅有部分家系的遗传易感原因是已知的,通常是由于基因突变引起的蛋白质功能缺失。在本研究中我们调查了1个胃癌家系,并且旨在鉴定该家系的胃癌易感基因。我们采集了该家系的外周血样本,选取其中的3例胃癌患者和1例正常样本进行全外显子组测序,并对测序数据进行了生物信息分析,共得到822905个SNV突变位点和208617个In Del突变位点。然后进行易感基因筛选,最终得到了12个SNV突变位点和9个In Del突变位点作为候选易感基因。其中SAMD9L在多种癌症中作为抑癌基因调控细胞增殖,而SAMD9L p.T832fs突变可能导致该基因功能缺失。我们在胃癌SGC-7901细胞中使用si RNA对SAMD9L进行敲减,发现SAMD9L基因表达水平的降低显著增强了SGC-7901细胞的增殖、迁移和侵袭能力。接下来在SGC-7901细胞中转染SAMD9L p.T832fs突变型过表达质粒,发现对SGC...

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语对照表
第一章 绪论
    1.1 胃癌的流行病学概述
    1.2 胃癌的主要分子机制
        1.2.1 胃癌中的基因突变
        1.2.2 表观遗传改变
        1.2.3 非编码RNA的作用
    1.3 家族性胃癌研究进展
    1.4 全外显子组测序简介
    1.5 实验设计与意义
第二章 全外显子组测序及易感基因筛选
    2.1 前言
    2.2 材料和设备
        2.2.1 主要试剂
        2.2.2 主要仪器
    2.3 实验方法
        2.3.1 全外显子组测序
        2.3.2 测序数据分析
        2.3.3 外周血基因组DNA提取
        2.3.4 测序结果验证
    2.4 实验结果
        2.4.1 全外显子组测序分析结果
        2.4.2 易感基因筛选结果
        2.4.3 一代测序验证结果
第三章 SAMD9L基因功能验证
    3.1 前言
    3.2 材料和设备
        3.2.1 细胞株
        3.2.2 主要仪器
        3.2.3 主要试剂
        3.2.4 主要溶液的配制
    3.3 实验方法
        3.3.1 细胞复苏
        3.3.2 细胞传代
        3.3.3 细胞冻存
        3.3.4 SAMD9L基因敲减
        3.3.5 细胞总RNA提取
        3.3.6 q RT-PCR验证基因表达
        3.3.7 CCK-8检测细胞增殖
        3.3.8 平板克隆形成实验
        3.3.9 划痕实验
        3.3.10 细胞迁移实验
        3.3.11 细胞侵袭实验
        3.3.12 细胞凋亡实验
    3.4 实验结果
        3.4.1 q RT-PCR验证SAMD9L基因敲减结果
        3.4.2 敲减SAMD9L促进胃癌细胞增殖和克隆形成
        3.4.3 敲减SAMD9L促进胃癌细胞迁移和侵袭
        3.4.4 敲减SAMD9L对细胞凋亡的影响
第四章 SAMD9L p.T832fs突变功能验证
    4.1 前言
    4.2 材料和设备
        4.2.1 主要试剂
        4.2.2 主要仪器
    4.3 实验方法
        4.3.1 过表达载体构建
        4.3.2 质粒提取
        4.3.3 质粒转染
        4.3.4 q RT-PCR验证过表达效率
    4.4 实验结果
        4.4.1 q RT-PCR验证过表达结果
        4.4.2 过表达突变型SAMD9L质粒对SGC-7901 细胞无显著影响
结论与讨论
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间取得的科研成果



本文编号：3803385