Rho/ROCK信号通路干预对多发性骨髓瘤细胞生物学特性及其机制的研究

发布时间：2023-04-30 04:01

　　目的探讨Rho/ROCK信号通路干预对人多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226细胞生物学特性及其Rho家族成员Rho C、ROCK家族成员中ROCK1/ROCK2表达的影响。方法5-氮杂-2ˊ-脱氧胞苷(5-Aza-Dc)、古曲霉素A(TSA)单独或联合作用于RPMI8226细胞系,用实时定量反转录聚合酶链锁反应(q RT-PCR)及蛋白印迹(Western Blot)检测药物作用后Rho C、ROCK1及ROCK2的表达;Rho A抑制剂CCG-1423、Rac1抑制剂NSC23766、ROCK抑制剂fasudil作用于RPMI8226细胞,应用Cell counting Kit-8(CCK-8)法检测细胞增殖活性,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡水平。结果CCG-1423、NSC23766、fasudil在一定浓度范围内可抑制RPMI8226细胞的生长,且呈剂量和时间依赖性(P<0.05);流式细胞术检测显示CCG-1423、NSC23766处理RPMI8226细胞后,细胞凋亡率较对照组明显升高,而fasudil组与对照组相比,细胞凋亡率较低,呈剂量依赖性(P<0.05);...

【文章页数】：44 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
第一章 实验材料
    1.1 细胞
    1.2 试剂
    1.3 仪器
第二章 方法
    2.1 实验分组
    2.2 细胞培养
    2.3 细胞冻存
    2.4 CCK-8 法检测细胞增殖能力
    2.5 流式细胞仪检测细胞凋亡水平
    2.6 qRT-PCR方法检测细胞系Rho、ROCK1和ROCK2基因表达水平
        2.6.1 提取细胞总RNA（Trizol法）
        2.6.2 将RNA反转录成cDNA
        2.6.3 引物的合成
        2.6.4 qRT-PCR检测RhoC、ROCK1及ROCK2 mRNA的表达
    2.7 Western Blot检测RhoC、ROCK1及ROCK2蛋白表达水平
        2.7.1 蛋白质提取
        2.7.2 制备SDS-PAGE凝胶
        2.7.4 蛋白质变性和电泳
        2.7.5 凝胶转膜
        2.7.6 抗体孵育
        2.7.7 曝光及扫描
    2.8 统计学分析
第三章 结果
    3.1 CCK-8 法检测细胞增殖
    3.2 流式细胞仪检测细胞凋亡结果
    3.3 qRT-PCR分析RhoC、ROCK1及ROCK2的表达量
    3.4 Western blot检测RhoC、ROCK1及ROCK2蛋白的表达结果
第四章 讨论
结论
参考文献
综述 Rho蛋白在肿瘤中的研究进展
    综述参考文献
攻读学位期间成果
致谢



本文编号：3806379