重组溶瘤痘病毒rVV-CCL5-SSTR2-Luc+的构建及其杀瘤活性

发布时间：2023-05-20 06:11

　　目的在体外构建携带CCL5和SSTR2双基因的重组溶瘤痘病毒,并初步检测其溶瘤活性。方法利用基因工程策略,分步构建重组痘病毒真核表达质粒pSC65-CCL5-SSTR2-Luc+;经同源重组痘病毒Western Reverse (WR)株和23轮筛选纯化后,获得纯化的重组溶瘤痘病毒rVV-CCL5-SSTR2-Luc+;经扩大培养及浓缩纯化后获得高滴度的重组溶瘤痘病毒,用ELISA和Western blot分别验证感染重组溶瘤痘病毒的HeLa细胞CCL5和SSTR2的表达变化;用CCK-8法检测了rVV-CCL5-SSTR2-Luc+对两株肿瘤细胞系的杀伤活力。结果成功构建了重组痘病毒真核表达质粒pSC65-CCL5-SSTR2-Luc+;经同源重组、筛选纯化和浓缩后,获得滴度为9.4×10⁸ PFU/mL的重组溶瘤痘病毒rVV-CCL5-SSTR2-Luc+;ELISA和Western blot结果表明,HeLa细胞感染rVV-CCL5-SSTR2-Luc+后,其CCL5和SSTR2蛋白表达水平显著高于对照组rVV-Luc+(分别为P<0.05和P<...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 试剂及试剂盒:
        1.1.2 细胞、质粒和病毒株:
    1.2 方法
        1.2.1 痘病毒真核表达载体pSC65-CCL5-SSTR2-Luc+的构建:
        1.2.2 同源重组构建pSC65-CCL5-SSTR2-Luc+/pSC65-Luc+重组痘病毒:
        1.2.3 痘病毒阳性重组子的筛选纯化:
        1.2.4 重组痘病毒的扩大培养及浓缩纯化:
        1.2.5 结晶紫染色法测定重组痘病毒滴度:
        1.2.6 ELISA和Western blot分别验证重组痘病毒的CCL5和SSTR2蛋白表达:
        1.2.7 CCK-8测定重组痘病毒肿瘤细胞杀伤活力:
2 结果
    2.1 重组质粒pSC65-CCL5-SSTR2-Luc的构建与鉴定
    2.2 重组痘病毒rVV-CCL5-SSTR2-Luc+/ rVV-Luc+的筛选纯化和病毒滴度测定
    2.3 重组痘病毒阳性重组子rVV-CCL5-SSTR2-Luc+的蛋白表达验证
    2.4 CCK-8检测rVV-CCL5-SSTR2-Luc+对肿瘤细胞系的杀伤活力
3 讨论



本文编号：3820693