CARMA3通过代谢途径调控膀胱肿瘤生长的机制研究

发布时间：2023-06-08 18:13

　　目的:膀胱癌是最常见的泌尿系统恶性肿瘤,同时是世界第九常见恶性肿瘤。对膀胱癌发生发展的机制进行深入的了解,将有助于改善膀胱癌的诊断与治疗手段,使更多患者从中受益。CARMA3在许多类型肿瘤中均高表达,并能在其中促进细胞的增殖与转移等多方面功能。一般认为CARMA3能够响应G蛋白偶联受体与受体酪氨酸激酶激活NF-κB通路,进而促进一系列下游癌基因的表达。因此在膀胱癌中CARMA3可能促进肿瘤的生长并可能作为潜在的治疗靶标。方法:在膀胱癌组织与细胞中利用实时定量PCR法检测CARMA3的表达水平,并在膀胱癌细胞中验证CARMA3对增殖、凋亡、转移等细胞功能的影响。利用RNA测序寻找CARMA3潜在的下游调控分子并利用实时定量PCR法与免疫印迹法进行验证。利用NF-κB抑制剂和Ch-IP确认CARMA3对其中一个调控分子CPS1的具体作用机制。在膀胱癌组织与细胞中利用实时定量PCR法检测CPS1的表达水平,并在膀胱癌细胞中验证CPS1对增殖与凋亡等功能的影响,并在细胞增殖与凋亡功能上确定CPS1对CARMA3的回复作用。利用膀胱癌细胞的代谢组学展示CARMA3对于细胞代谢水平的影响。通过上下...

【文章页数】：98 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 :CARMA3蛋白在膀胱癌中的作用
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 临床资料及实验材料
            2.1.1 临床资料
        2.2 实验试剂所需要主要仪器,药品,试剂
            2.2.1 实验细胞系
            2.2.2 实验仪器
            2.2.3 实验试剂
        2.3 实验方法
            2.3.1 细胞培养
            2.3.2 细胞转染
            2.3.3 实时定量逆转录聚合酶链式反应RT-q PCR
            2.3.4 免疫印迹法WesternBlot
            2.3.5 迁移与侵袭实验Transwell
            2.3.6细胞增殖实验CCK8
            2.3.7 细胞增殖实验EdU
            2.3.8 流式检测细胞凋亡
            2.3.9 裸鼠成瘤实验
            2.3.10 质粒抽提
            2.3.11 热激转化法扩增质粒
            2.3.12 统计学分析
    3 结果
        3.1 CARMA3在膀胱癌标本中高表达
        3.2 CARMA3 调节NF-κB通路的表达
        3.3 CARMA3影响膀胱癌细胞的增殖
        3.4 CARMA3影响膀胱癌细胞的凋亡
        3.5 CARMA3影响膀胱癌细胞的迁移与侵袭
        3.6 CARMA3影响小鼠体内肿瘤的生长
    4 讨论
    5 结论
第二部分 :CARMA3通过调控CPS1影响膀胱肿瘤细胞的生长
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 临床资料及实验材料
            2.1.1 临床资料
        2.2 实验试剂所需要主要仪器,药品,试剂
            2.2.1 实验细胞系
            2.2.2 实验仪器
            2.2.3 实验试剂
        2.3 实验方法
            2.3.1 细胞培养
            2.3.2 细胞转染
            2.3.3 实时定量逆转录聚合酶链式反应RT-q PCR
            2.3.4 免疫印迹法Western Blot
            2.3.5细胞增殖实验CCK8
            2.3.6 细胞增殖实验EdU
            2.3.7 流式检测细胞凋亡
            2.3.8 RNA测序
            2.3.9 染色质免疫共沉淀Ch-IP
            2.3.10 统计学分析
    3 结果
        3.1 CARMA3敲减的转录组学结果
        3.2 确定CPS1为CARMA3 下游基因
        3.3 NF-κB通路对CPS1 的调控机制
        3.4 CPS1在肿瘤中的功能
        3.5 CPS1在膀胱癌细胞系中的功能
        3.6 CPS1 回复CARMA3 功能
    4 讨论
    5 结论
第三部分 :CARMA3通过CPS1调控肿瘤核酸代谢
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验试剂所需要主要仪器,药品,试剂
            2.1.1 实验细胞系
            2.1.2 实验仪器
            2.1.3 实验试剂
        2.2 实验方法
            2.2.1 细胞培养
            2.2.2 细胞转染
            2.2.3细胞增殖实验CCK8
            2.2.4 流式检测细胞凋亡
            2.2.5 代谢组学
            2.2.6 氨检测试剂盒
            2.2.7 尿素检测试剂盒
            2.2.8 统计学分析
    3 结果
        3.1 代谢组学结果整体解读
        3.2 CARMA3 影响CPS1 的代谢过程。
        3.3 CARMA3调节核酸类代谢物对膀胱癌细胞功能的影响
    4 讨论
    5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的科研成果
致谢
个人简历



本文编号：3832244