嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞体外培养体系及慢病毒侵染条件的优化

发布时间：2023-06-10 12:08

　　目的优化嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞的体外培养体系及慢病毒侵染条件。方法 CD3磁珠分离纯化健康人外周血单个核细胞(PBMC)及健康孕妇脐带血单个核细胞(UCBMC),于8种不同培养体系进行扩增培养,培养体系包括以下成分的不同组合:重组人白细胞介素2(rhIL-2)、rhIL-12、rhIL-18、rhIL-7、 rhIL-21、 TWS119。分别于第0、 3、 5、 7、 10、 18天进行细胞计数检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞程序性死亡蛋白1(PD-1)的表达, ELISA检测γ干扰素(IFN-γ)释放,优化T细胞体外培养体系。采用(0、 20、 50)μg/mL重组人纤连蛋白(RetroNectin^?),(250、 500、 1000)ng/mL抗人CD3/CD28抗体包被培养板,以感染复数(MOI)=3、 5的阴性对照慢病毒侵染T细胞72 h,于荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)表达情况,初步判断病毒侵染效率;流式细胞术检测CD3/GFP阳性率,以获得慢病毒侵染条件。包装CD19 CAR慢病毒,实时荧光定量PCR、 Western blot...

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 磁珠分离外周血及脐带血T细胞
        1.2.2 分离细胞的扩增培养
        1.2.3 流式细胞术检测单个核细胞PD-1表达
        1.2.4 ELISA检测培养的单个核细胞上清液IFN-γ水平
        1.2.5 慢病毒侵染
        1.2.6 流式细胞术检测病毒侵染T细胞效率
        1.2.7 构建并制备CD19CAR慢病毒
        1.2.8 统计学分析
2 结果
    2.1 磁珠分离外周血及脐带血T细胞
    2.2外周血及脐带血T细胞体外培养体系的优化
    2.3 病毒侵染条件优化
    2.4 CAR-T细胞的制备及培养
3 讨论



本文编号：3832857