癌基因C-jun及其缺失突变体过表达细胞株的构建与鉴定

发布时间：2023-07-25 05:18

　　为了探究转录因子C-jun在细胞中的生理功能,以真核细胞表达质粒pFlag-c-jun为模板,首先设计了C-jun DNA结合功能域缺失突变体的点突变引物序列,构建Flag-C-jun DNA结合功能域缺失突变体质粒pFlag-c-jun^mut.通过细胞转染、药物筛选等方法,获得Flag-C-jun和Flag-C-jun^mut稳定表达的HelaS细胞株,用蛋白印记迹交和细胞免疫荧光染色方法对细胞株进行验证.鉴定结果表明,本研究成功构建了Flag-C-jun和Flag-C-jun^mut稳定表达的细胞株,且表达均在细胞核内.

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料与试剂
        1.1.1 质粒和细胞
        1.1.2 主要试剂和工具酶
    1.2 方法
        1.2.1 Flag-C-jun DNA结合功能域缺失突变体质粒的引物序列设计
        1.2.2 点突变
        1.2.3 质粒转染
        1.2.4 稳筛细胞株的构建
        1.2.5 蛋白质印迹杂交
        1.2.6 细胞免疫荧光染色
2 结果与分析
    2.1 真核细胞表达质粒p Flag-c-jun的酶切鉴定
    2.2 构建Flag-c-jun DNA结合功能域缺失突变体质粒pFlag-c-junmut
    2.3 Flag-C-jun和Flag-C-junmut稳定表达细胞株的构建
3 讨论



本文编号：3837234