S100A4与p53在活细胞内相互作用研究

发布时间：2023-07-27 07:04

　　目的体外研究发现S100A4蛋白可与p53蛋白结合,但至今尚不清楚S100A4与p53蛋白能否在活细胞内发生相互作用。本研究旨在确定S100A4与p53在活细胞内的相互作用。方法采用光学生物传感器体外检测S100A4蛋白与p53蛋白的结合能力。应用激光共聚焦显微镜的荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)技术检测Hela细胞(人宫颈癌细胞株)内S100A4与p53蛋白的相互作用。结果光学生物传感器体外检测发现,野生型S100A4蛋白与p53蛋白结合能力强,对照组突变型S100A4蛋白则失去与p53蛋白的结合能力。采用FRET技术发现,表达CFP-S100A4和p53-YFP融合蛋白的Hela细胞中,细胞核内p53-YFP的荧光强度衰减后,CFP-S100A4的荧光强度增强,发生FRET;而细胞质中没有发生FRET。作为对照,表达突变CFP-mS100A4-C和p53-YFP融合蛋白,或表达S100A4和YFP的Hela细胞内没有发生FRET,表明S100A4和p53之间的相互作用发生在活细胞的细胞核中。结论活细胞内S10...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 主要试剂与仪器
    1.2 质粒载体构建
    1.3 重组融合蛋白表达
    1.4 体外检测S100A4与p53结合能力
    1.5 细胞培养与转染
    1.6 共聚焦激光扫描显微镜和FRET分析
2 结果
    2.1 体外鉴定S100A4与p53相互作用
    2.2 YFP荧光衰减和FRET检测结果
3 讨论



本文编号：3837559