基于NOD/SCID小鼠探讨雄黄干预THP-1白血病细胞影响其端粒蛋白表达的研究

发布时间：2023-09-29 03:57

　　目的:本研究选取雄黄单药,通过影响端粒蛋白POT1、TRF1、TRF2的表达,探讨其对端粒动力学的调节作用,为药物靶向用于急性单核细胞白血病的治疗寻求实验学支持,以期为研制治疗急性单核细胞白血病的临床新型药物提供理论支持。方法:1.体外实验:(1)培养THP-1细胞株。(2)CCK-8法检测不同浓度、不同时间点雄黄作用于THP-1细胞影响其体外生长的作用,并明确其IC50值。(3)Annexin V/PI双染法FCM检测细胞凋亡情况;PI单染法FCM检测细胞周期分布情况。(4)Western-blot检测POT1、TRF1、TRF2蛋白表达水平。(5)实时定量PCR检测用药组POT1、TRF1、TRF2-m RNA表达。2.体内实验:(1)以THP-1细胞株作用于NOD/SCID小鼠为实验平台,给予雄黄灌胃干预。(2)观察小鼠给药后反应,濒死小鼠组织行病理学方面检查。(3)给药3周后处死小鼠,取脾细胞悬液采用流式细胞术检测细胞凋亡率及分析细胞周期改变;免疫组化检测POT1、TRF1、TRF2蛋白表达的改变情况。结果:1.体外实验:(1)CCK-8法示雄黄对THP-1细胞具有阻碍增殖作用...

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【学位级别】：硕士

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提要
abstract
引言
第一部分 雄黄影响急性单核细胞白血病THP-1 细胞端粒蛋白表达的体外研究
    1 实验材料
        1.1 细胞株
        1.2 实验材料
    2 实验方法
        2.1 细胞培养
        2.2 实验药品
        2.3 CCK-8 法检测细胞活性
        2.4 流式细胞术分析细胞凋亡率及细胞周期分布
        2.5 Western-blot检测端粒蛋白（POT1、TRF1、TRF2）的表达
        2.6 实时荧光定量PCR检测POT1、TRF1、TRF2-mRNA表达改变
    3 实验结果
        3.1 CCK-8 法检测细胞活性
        3.2 细胞凋亡率、细胞周期检测
        3.3 Western-blot检测蛋白的表达水平改变及相关性
        3.4 PCR检测POT1、TRF1、TRF2- mRNA表达水平
第二部分 雄黄影响急性单核细胞白血病THP-1 细胞端粒蛋白表达的体内研究
    实验一 THP-1/NOD-SCID小鼠动物模型的建立及鉴定
        1 实验材料
            1.1 实验细胞及动物
            1.2 病理试剂、实验器械及耗材
            1.3 主要仪器和设备
        2 实验方法
            2.1 细胞培养
            2.2 动物分组及THP-1 细胞接种
            2.3 观察NOD/SCID小鼠的一般状况及存活时间
            2.4 外周血白细胞计数及血涂片检测
            2.5 骨髓涂片
            2.6 病理组织学检查
        3 实验结果
            3.1 一般情况
            3.2 外周血细胞计数及涂片镜检
            3.3 骨髓细胞学检查
            3.4 组织病理学检查
    实验二 雄黄对THP-1/NOD-SCID小鼠生存时间、细胞凋亡、细胞周期、蛋白表达的影响
        1 实验材料
            1.1 实验细胞及动物
            1.2 实验药物、试剂及器材
        2 实验方法
            2.1 药物干预
            2.2 一般情况及存活时间
            2.3 流式细胞术分析细胞凋亡率及细胞周期分布
            2.4 免疫组化检测
            2.5 统计学方法
        3 实验结果
            3.1 生存时间
            3.2 细胞凋亡率和细胞周期的检测
            3.3 免疫组化法检测相关蛋白表达
第三部分 讨论
    1 中医学对AML的认识
        1.1 病因
        1.2 病机
        1.3 治疗原则
    2 端粒酶、端粒蛋白
        2.1 端粒酶
        2.2 端粒蛋白
    3 NOD/SCID鼠
    4 药物分析
        4.1 雄黄的药理作用
        4.2 雄黄的研究背景
    5 实验结果的讨论
        5.1 雄黄体外试验
        5.2 雄黄对THP-1/NOD-SCID小鼠的体内试验
结语
参考文献
综述
    参考文献
附录
致谢
攻读学位期间发表的学术论文目录及科研参与情况
发表论文



本文编号：3849243