内吞型EpCAM纳米抗体的筛选及鉴定

发布时间：2023-10-11 21:05

　　上皮细胞黏附分子(epithelial cell adhesion molecule, EpCAM)是肿瘤靶向治疗的热门靶点,本研究开发了3株高特异性针对EpCAM的胞吞型纳米抗体,为基于此靶点的免疫毒素研究提供基础。研究前期对骆驼免疫EpCAM-Fc蛋白,构建了高质量的噬菌体展示纳米抗体文库,运用噬菌体展示技术通过3轮淘选成功获得了17株互补决定区(complementarity determining region, CDR) 3序列不同的EpCAM纳米抗体,原核纯化获得高纯度的抗体蛋白后,流式细胞术确定其中7株具有细胞水平高结合活性。动物实验经复旦大学药学院实验动物伦理委员会(IACUC)批准。通过流式细胞术和激光共聚焦显微术最终鉴定出3株具有较高胞吞活性的EpCAM纳米抗体,且ForteBio测定具高亲和力。本研究以期为EpCAM阳性肿瘤的靶向治疗开辟新的途径,并为其他靶点的纳米抗体免疫毒素研究提供指导。

【文章页数】：9 页

【文章目录】：
材料与方法
结果
    1 Ep CAM高质量噬菌体展示纳米抗体文库的构建及质量评估
    2噬菌体展示技术筛选特异性Ep CAM纳米抗体
    3 PE-ELISA鉴定Ep CAM特异性阳性克隆
    4阳性克隆序列分析
    5 Ep CAM纳米抗体原核表达及纯化
    6候选Ep CAM纳米抗体的细胞结合活性分析
    7候选Ep CAM纳米抗体的肿瘤细胞胞吞活性检测
    8激光共聚焦显微术鉴定候选Ep CAM纳米抗体胞吞活性
    9纳米抗体亲和力检测
讨论



本文编号：3852788