HCV NS2、NS3/4A蛋白对人肝癌Huh7细胞基因组稳定性的影响

发布时间：2023-11-11 10:54

　　目的:肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是我国发病率和死亡率分别位居第四位和第三位的癌症“杀手”,到目前为止仍缺乏有效的防治手段。丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)慢性感染与肝癌的发生发展密切相关,但相关的分子机制仍不清楚。因此本研究拟初步探讨HCV编码的非结构蛋白NS2和NS3/4A对细胞基因组稳定性的影响,以期为HCV感染相关的HCC发病机制提供新的视角。方法:1.质粒构建:以p CMV-tag2B为载体,以HCV 2a型JFH-1株基因为模板,采用双酶切法构建HCV NS2基因的重组载体p CMV-tag2B-NS2,经酶切和DNA测序进行鉴定;2.WB和DAPI染色分析:在Huh7细胞中分别转染空载体、HCV NS2及NS3/4重组载体后,采用Western blot和/或DAPI染色分析不同药物处理(CPT、Taxol及Nutlin-3)处理时HCV蛋白对DNA损伤应答信号和凋亡的影响;3.免疫荧光检测:在U2OS细胞中分别转染空载体、HCV NS3/4A重组载体后,用免疫荧光方法检测γ-Tubulin和α-Tubulin...

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
常用缩写词中英文对照表
前言
第一部分 HCV NS2蛋白对细胞凋亡及DNA损伤应答信号的影响
    1 材料与试剂
        1.1 细胞、菌株和质粒
        1.2 实验试剂
        1.3 常用试剂的配制
        1.4 仪器
    2 实验方法
        2.1 重组质粒pCMV-tag2B-NS2的构建
        2.2 Western blot检测HCV NS2蛋白的表达
        2.3 DAPI染色检测细胞凋亡
        2.4 Western blot检测DNA损伤应答相关蛋白的表达
        2.5 FACS检测细胞
        2.6 统计学分析
    3 结果
        3.1 HCV NS2基因的扩增
        3.2 pCMV-tag2B-NS2重组质粒的构建与鉴定
        3.3 pCMV-tag2B-NS2重组质粒在Huh7细胞中的表达
        3.4 HCV NS2蛋白对Huh7细胞凋亡的影响
        3.5 HCV NS2蛋白对Huh7细胞DNA损伤应答的影响
        3.6 HCV NS2蛋白对Huh7细胞周期的影响
    4 讨论
    5 结论
第二部分HCV NS3/4A蛋白对细胞DNA损伤和有丝分裂的影响
    1 材料与试剂
        1.1 细胞、菌株和质粒
        1.2 实验试剂
        1.3 常用试剂的配制
        1.4 仪器
    2 实验方法
        2.1 Huh7细胞培养
        2.2 质粒转染Huh7细胞
        2.3 免疫荧光法检测细胞有丝分裂及中心体
        2.4 Western blot检测DNA损伤应答相关蛋白的表达
        2.5 FACS检测细胞
        2.6 MTT法检测细胞增殖活力
        2.7 统计学分析
    3 实验结果
        3.1 HCV NS3/4A蛋白对Huh7细胞DNA损伤应答信号活化的影响
        3.2 HCV NS3/4A蛋白对细胞有丝分裂的影响
        3.3 HCV NS3/4A蛋白对细胞中心体的影响
        3.4 药物处理后HCV NS3/4A蛋白对细胞DNA损伤应答信号的影响
        3.5 HCV NS3/4A蛋白对细胞周期的影响
    4 讨论
    5 结论
参考文献
综述
    参考文献
致谢
在学期间承担/参与的科研课题与研究成果
个人简历



本文编号：3862492