NCOA7在肺癌细胞中的抗氧化机制研究

发布时间：2023-12-25 16:01

　　目的本论文旨在探究核受体辅活化蛋白7(Nuclear receptor co-activator 7,NCOA7)在肺癌细胞中的抗氧化机制,为肺癌的治疗及其耐药性的研究提供一种新的思路。方法1.采用慢病毒表达系统NCOA7 shRNA在非小细胞肺癌A549细胞中敲低NCOA7,构建A549-shNCOA7细胞株。同时在A549-shNCOA7细胞株中恢复表达NCOA7野生型(NCOA7-WT)或其突变体(N775,L522A/I523A,Del N105)。NCOA7的敲低和表达效果采用免疫印迹法检测。2.采用细胞计数法检测NCOA7敲低细胞株(A549-shNCOA7)和对照细胞株(A549-shLUC)在有无H₂O₂处理条件下的细胞增殖水平。3.采用划痕和小室迁移分析法检测A549-shNCOA7和A549-shLUC细胞株以及NCOA7-WT或其突变体恢复表达细胞株在有无H₂O₂处理条件下的细胞迁移能力。4.用光学显微镜观察A549-shNCOA7和A549-shLUC细胞株以及NCOA7-W...

【文章页数】：86 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 绪论
    1.1 非小细胞肺癌
    1.2 氧化应激反应
        1.2.1 概念
        1.2.2 氧化应激反应与肿瘤
    1.3 核受体辅活化蛋白7(NCOA7)
        1.3.1 NCOA7 简介
        1.3.2 NCOA7 在疾病及癌症中的作用
    1.4 细胞的粘附与迁移
    1.5 研究意义
第二章 NCOA7 在肺癌细胞抵抗氧化应激反应中的作用
    2.1 实验仪器和实验试剂
        2.1.1 实验细胞
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 实验耗材
        2.1.4 实验仪器
        2.1.5 试剂配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 感受态细胞的制备
        2.2.3 质粒的扩增与抽提
        2.2.4 稳定敲低NCOA7 基因细胞株的建立
        2.2.5 免疫印迹法检测NCOA7 蛋白表达水平
        2.2.6 细胞增殖实验
        2.2.7 细胞迁移实验
        2.2.8 细胞免疫荧光染色法
    2.3 统计学方法
    2.4 实验结果
        2.4.1 NCOA7 抵抗氧化应激反应促进肺癌细胞的增殖和迁移
        2.4.2 NCOA7 通过抗氧化作用促进肺癌细胞的F-actin和黏着斑的形成
    2.5 讨论
第三章 NCOA7的ERbd在肺癌细胞抵抗氧化应激中的作用
    3.1 实验器材与实验试剂
        3.1.1 实验细胞
        3.1.2 实验试剂
        3.1.3 实验耗材
        3.1.4 实验仪器
        3.1.5 试剂配制
    3.2 实验方法
        3.2.1 GST pull-down实验
        3.2.2 免疫印迹法
        3.2.3 免疫荧光染色
        3.2.4 细胞迁移实验
    3.3 统计学方法
    3.4 实验结果
        3.4.1 NCOA7的ERbd结构域抵抗氧化应激促进肺癌细胞的粘附与伸展
        3.4.2 NCOA7的ERbd抵抗氧化应激反应促进肺癌细胞的迁移
        3.4.3 NCOA7的ERbd通过抗氧化作用促进肺癌细胞的F-actin和黏着斑形成
    3.5 讨论
第四章 NCOA7 的抗氧化机制探究
    4.1 实验器材与实验试剂
        4.1.1 实验细胞
        4.1.2 实验试剂
        4.1.3 实验耗材
        4.1.4 实验仪器
        4.1.5 试剂配制
    4.2 实验方法
        4.2.1 Co-IP实验
        4.2.2 免疫荧光染色
    4.3 统计学方法
    4.4 实验结果
        4.4.1 NCOA7 与单氧化酶MICAL1 相互作用
        4.4.2 NCOA7被MICAL1 的氧化酶活性诱导入核
        4.4.3 NCOA7被MICAL1 的氧化酶活性诱导入核不依赖其核受体结合位点
    4.5 讨论
结论与展望
    结论
    展望
参考文献
致谢
攻读硕士期间发表的论文



本文编号：3875243