食管癌中lncRNA、miRNA、mRNA的差异表达分析及SLC2A1-AS1在食管鳞癌侵袭和糖酵解中的作用及分子机制

发布时间：2024-01-19 15:25

　　背景和目的:长链非编码RNAs(long noncodingRNAs,lncRNAs)在肿瘤的起始和进展中发挥重要作用,可能成为肿瘤诊断、预后和治疗的分子标记。本研究旨在探讨食管癌(esophageal cancer,ESCA)中差异表达的lncRNA分子、寻找新的预后相关的分子标记,并探讨SLC2A1-AS1在食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中的生物学功能及其分子机制。方法:TCGA数据库用来分析ESCA中差异表达的lncRNA、miRNA和mRNA及其相互调控网络及预后相关的lncRNA。q RT-PCR检测ESCC组织和细胞中SLC2A1-AS1、miR-378a-3p和SLC2A1的表达。荧光素酶实验证实转录因子GLI3与SLC2A1-AS1启动子的相互作用。将GLI3 siRNA或pc DNA3.1-GLI3转染ESCC细胞,采用q RT-PCR检测GLI3和SLC2A1-AS1的表达。CCK-8、克隆形成实验、Ed U染色、流式细胞术和Transwell小室检测ESCC细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的变化。Western...

【文章页数】：135 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
基金项目
摘要
abstract
中英文缩略词
引言
第一部分 :食管癌中lncRNA、miRNA和 mRNA的差异表达及lncRNA的预后分析
    前言
    1 材料与方法
        1.1 数据下载
        1.2 数据预处理及差异表达分析
        1.3 lncRNA、miRNA及 mRNA调控关系预测
        1.4 ceRNA机制预测及网络构建
        1.5 ceRNA网络功能预测及相关miRNA和 lncRNA功能预测
        1.6 GEO数据库证实TCGA数据库的有效性
        1.7 lncRNA和 mRNA在 ESCA中的相关性分析
        1.8 构建预后相关的lncRNAs分子
    2 结果
        2.1 LncRNAs、miRNAs和 mRNAs在 ESCA中的差异表达分析
        2.2 GO和 KEGG分析ESCA中 lncRNA、miRNA和 mRNA的功能
        2.3 ESCA中 lncRNA-miRNA-mRNA轴 ceRNA网络分析
        2.4 GEO数据集证实lncRNAs和 mRNAs的表达
        2.5 lncRNAs与 ESCA患者总的生存率的关系
        2.6 ESCA中 lncRNAs与 mRNAs相关性分析
    3 讨论
    4 小结
第二部分 :GLI3 调控的SLC2A1-AS1 促进食管鳞癌细胞的糖酵解及其分子机制
    前言
    1 实验材料
        1.1 组织标本
        1.2 实验细胞
        1.3 实验动物
        1.4 主要仪器设备
        1.5 主要试剂
        1.6 主要试剂的配制
        1.7 引物序列
        1.8 探针
        1.9 动物注射NC和 siRNA
    2 实验方法
        2.1 TCGA和 GEO分析ESCA中基因的表达
        2.2 细胞复苏、传代及冻存
        2.3 qRT-PCR检测基因表达
        2.4 SLC2A1-AS1 的亚细胞定位
        2.5 pcDNA3.1-SLC2A1-AS1、pcDNA3.1-GLI3和pcDNA3.1-SLC2A1重组载体的构建
        2.6 细胞转染
        2.7 q RT-PCR检测转染后ESCC细胞中基因表达
        2.8 CCK-8 法检测ESCC细胞增殖
        2.9 流式细胞仪检测细胞凋亡
        2.10 Transwell检测ESCC细胞迁移
        2.11 Transwell检测ESCC细胞侵袭
        2.12 克隆形成实验
        2.13 EdU法检测细胞增殖
        2.14 Western blot
        2.15 葡萄糖消耗量及乳酸生成量测定
        2.16 双荧光素酶报告实验
        2.17 Ago2-RNA免疫共沉淀(Ago2-RNA immunoprecipitation,Ago2-RIP)
        2.18 裸鼠成瘤实验
        2.19 免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)
        2.20 IHC染色结果评估
        2.21 统计学分析
    3 结果
        3.1 SLC2A1-AS1在ESCC中的表达
        3.2 SLC2A1-AS1与ESCC临床病理学参数及预后的关系
        3.3 转录因子GLI3 结合SLC2A1-AS1 的启动子并调控SLC2A1-AS1 的表达
        3.4 SLC2A1-AS1 调控ESCC细胞中GLI3 的表达
        3.5 SLC2A1-AS1 表达下调抑制ESCC细胞的增殖和诱导细胞凋亡
        3.6 SLC2A1-AS1 表达下调抑制ESCC细胞的侵袭和EMT进程
        3.7 SLC2A1-AS1 表达下调抑制ESCC细胞的糖酵解过程
        3.8 SLC2A1-AS1 过表达对ESCC细胞增殖和凋亡的影响
        3.9 SLC2A1-AS1 过表达促进ESCC细胞的侵袭和EMT进程
        3.10 SLC2A1-AS1 过表达促进ESCC细胞的糖酵解过程
        3.11 SLC2A1-AS1在ESCC细胞中的定位
        3.12 SLC2A1-AS1对ESCC细胞中miR-378a-3p表达的影响
        3.13 miR-378a-3p和 SLC2A1 在食管鳞癌组织和细胞中的表达
        3.14 miR-378a-3p表达与食管鳞癌病人临床病理学参数之间的关系
        3.15 SLC2A1的表达与食管鳞癌病人临床病理学参数之间的关系
        3.16 miR-378a-3p靶向调控食管鳞癌细胞中SLC2A1 的表达
        3.17 SLC2A1-AS1和SLC2A1 的过表达逆转miR-378a-3p介导的增殖、凋亡和侵袭能力的变化
        3.18 SLC2A1-AS1和SLC2A1 的下调逆转miR-378a-3p抑制剂介导的增殖、凋亡和侵袭能力的变化
        3.19 SLC2A1-AS1和SLC2A1 的过表达逆转miR-378a-3p介导的ESCC细胞糖酵解能力的降低
        3.20 SLC2A1-AS1和SLC2A1 的下调逆转miR-378a-3p抑制剂介导的ESCC细胞糖酵解能力的增强
        3.21 SLC2A1-AS1 体内抑制ESCC EC9706 裸鼠移植瘤的生长
        3.22 SLC2A1-AS1 通过miR-378a-3p/SLC2A1 促进ESCC进展
    4 讨论
    5 小结
全文结论
参考文献
综述 长链非编码RNA在肿瘤糖代谢中作用及其研究进展
    参考文献
个人简历、硕士期间发表论文
致谢



本文编号：3880039