COX-2通过调控VEGF表达诱导肺腺癌血管形成的机制研究

发布时间：2024-02-22 06:34

　　目的:本文旨在研究环氧合酶-2(COX-2)能否通过血管内皮生长因子(VEGF)诱导肺腺癌微血管形成。方法:将COX-2小分子干扰RNA(siRNA-COX-2),VEGF小分子干扰RNA(siRNA-VEGF)或COX-2过表达质粒(p LV-COX-2)转染到肺腺癌A549细胞中,WB验证其转染效率,转染效率(29)70%的细胞用于后续试验。对A549细胞进行转染后,分别提取细胞蛋白和细胞上清,然后利用WB和ELISA分别检测细胞及上清液中VEGF的含量。将A549细胞上清液制成条件培养基,用来培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),然后分别用MTT实验评估HUVECs的增殖能力、细胞划痕实验评估HUVECs的迁移能力、细胞侵袭实验评估HUVECs的侵袭能力,小管生成实验评估HUVECs的小管生成能力。每组实验重复3次,最后对结果进行统计学分析。结果:A549细胞成功转染进siRNA-COX-2后,细胞及上清液中VEGF的表达量显著减少;A549细胞成功转染进p LV-COX-2后,细胞及上清液中VEGF的表达量显著上升。siRNA-COX-2组HUVECs的增殖率、迁移率、侵袭细胞...

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
1.前言
2.实验材料
    2.1 细胞
    2.2 主要实验试剂
    2.3 主要实验器材
    2.4 主要实验仪器
    2.5 实验试剂配制
3.实验方法
    3.1 细胞培养与传代
    3.2 siRNA转染(敲低COX-2和VEGF)
    3.3 质粒转染(过表达COX-2)
    3.4 Western bloting
        3.4.1 细胞总蛋白提取及样品的制备
        3.4.2 BCA定量
        3.4.3 SDS-PAGE
        3.4.4 转膜
        3.4.5 丽春红染色
        3.4.6 封闭及免疫反应
        3.4.7 ECL显色
    3.5 酶联免疫吸附实验(ELISA)
    3.6 MTT
    3.7 细胞划痕实验
    3.8 细胞侵袭实验
    3.9 小管生成实验
4.统计学分析
5.实验结果
    5.1 COX-2对A549 细胞VEGF表达的影响。
    5.2 COX-2对A549 细胞上清中VEGF表达的影响
    5.3 A549 细胞中COX-2对HUVECs增殖的影响
    5.4 A549 细胞中COX-2对HUVECs迁移的影响
    5.5 A549 细胞中COX-2对HUVECs侵袭的影响
    5.6 A549 细胞中COX-2对HUVECs小管生成的影响
6.讨论
7.结论
8.参考文献
9.附录
    9.1 个人简历
    9.2 在校期间取得成果
        9.2.1 读研期间奖励
        9.2.2 读研期间发表论文
        9.2.3 读研期间申请专利
        9.2.4 读研期间参与完成科研项目
10.致谢
11.综述 环氧合酶2在肿瘤血管生成中的作用
    参考文献



本文编号：3906541