ANXA5通过ERK/RAC1调控肝癌/肾透明细胞癌进展及转移的研究

发布时间：2024-03-05 21:16

　　背景:Annexin A5(ANXA5)是Ca²⁺依赖性磷脂结合蛋白,为膜联蛋白家族成员,由319个氨基酸组成(35 kDa)。ANXA5在维持细胞膜稳定性,胞吞胞吐,调节细胞增殖,分化,凋亡以及炎症和血栓形成过程中发挥重要作用。研究表明,ANXA5异常表达与肿瘤临床进展、耐药和转移等相关。肝癌和肾癌是两种常见的恶性肿瘤,具有发生率高,转移率高,预后不良等特点。肿瘤转移是影响癌症患者预后和生存的最主要原因,探索肿瘤发生进展的分子机制,寻找肿瘤预防、诊断和治疗的新靶点具有重要意义。本组前期发现,ANXA5与鼠肝癌相关,其水平变化潜在与鼠肝癌细胞体内外恶性表型和体内成瘤恶性程度及淋巴转移相关,而其在肾癌中研究鲜有报道。本论文就ANXA5对肝癌和肾癌进展,临床相关性及作用机制进行了研究。目的:1.ANXA5在HCC和ccRCC患者临床样本中的表达水平检测及与临床相关性;2.ANXA5表达水平对肝癌细胞Hca-P和ccRCC细胞786-O和ACHN体外恶性表型及体内成瘤和转移能力的影响;3.明确ANXA5与MYH9直接作用关系;4.阐述ANXA5通过ERK/RAC1调控肝...

【文章页数】：114 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
第一部分 ANXA5高表达通过激活MEK/ERK、DOCK180/CRK1/II/RAC1促进肝癌临床进展
    材料和方法
        一.材料
            1.动物,细胞系和肝癌临床样本
            2.主要仪器及试剂
        二.方法
            1.细胞复苏与培养
            2.免疫组化法检测肝癌组织芯片中ANXA5,CRKI/II,RAC1的表达
            3.建立ANXA5表达稳定下调Hca-P细胞株
            4.功能实验
            5.ANXA5低表达对Hca-P体内成瘤和淋巴道转移潜能的影响
            6.ANXA5低表达对Hca-P细胞CRK/DOCK180/RAC1和pMEK-ERK分子蛋白表达的影响
            7.qRT-PCR法检测ANXA5下调对VEMENTIN和MMP9的影响
            8.统计学分析
    结果
        1.ANXA5,CRKI/II,RAC1高表达促进肝癌临床进展,三者表达水平正相关
        2.构建ANXA5表达稳定下调Hca-P单克隆细胞株
        3.ANXA5低表达降低Hca-P细胞体外增殖能力
        4.ANXA5低表达减弱Hca-P细胞体外转移能力
        5.ANXA5低表达降低Hca-P细胞体内成瘤和淋巴道转移能力
        6.ANXA5低表达降低CRK/DOCK180/RAC1和pMEK-ERK分子蛋白水平
    讨论
    结论
    参考文献
第二部分 ANXA5与MYH9直接相互作用通过ERK/RAC1促进肾透明细胞癌发生发展
    材料和方法
        一.材料
            1.动物、细胞系、菌种和肾癌临床样本
            2.主要仪器及试剂
        二.方法
            1.细胞复苏与培养
            2.WB检测ccRCC临床样本ANXA5、MYH9、RAC1表达
            3.构建ANXA5稳定低表达786-O和ACHN单克隆细胞株
            4.获得ANXA5高表达786-O和ACHN细胞株
            5.功能实验
            6.ANXA5和MYH9直接相互作用研究
            7.ANXA5和MYH9直接相互作用影响ccRCC细胞恶性表型的功能实验
            9.ANXA5低表达对ACHN细胞体内成瘤和淋巴道转移潜能的影响
            10.统计学分析
    结果
        1.ANXA5和RAC1在ccRCC患者肿瘤组织中高表达正相关
        2.ANXA5对786-O和ACHN细胞生物学行为的影响
        3.ANXA5与MYH9直接相互作用研究
        4.MYH9促进ccRCC临床进展及作用机制研究
        5.MYH9低表达后与其直接结合的ANXA5减少
        6.ANXA5-MYH9直接作用影响肾癌细胞增殖和转移能力
        7.ANXA5可调控p-AKT、p-ERK1/2、RAC1等分子的蛋白表达
        8.ANXA5低表达降低ACHN细胞体内肿瘤形成能力及淋巴结转移潜能
    讨论
    结论
    参考文献
综述
    参考文献
致谢



本文编号：3920057