CYP2E1通过ROS负调控Wnt/β-catenin通路抑制肝细胞癌进展

发布时间：2024-03-21 18:56

　　背景肝细胞癌(HCC)是位列世界第四的恶性肿瘤,死亡率极高,迄今肝癌发生发展的分子机制尚未系统性阐明。细胞色素P450氧化酶(CYP)2E1是重要的肝脏药物代谢酶,主要参与前致癌物及环境毒物代谢。CYP2E1在肝癌中的作用,以往的研究主要集中在CYP2E1在体内代谢活化前致癌物如乙醇、亚硝胺,生成致癌物质,导致基因突变诱发癌症。然而,随着肝癌的进展,癌组织中的CYP2E1表达逐渐下降,并且CYP2E1低表达与肝癌的恶性生物学特征及患者短的生存期相关。CYP2E1在肝癌恶性进展过程中是否发挥特定的生物学功能以及通过何种机制发挥作用,尚不清楚。肝癌的发生与多种信号转导通路失调密切相关,Wnt/β-catenin信号转导通路是肝癌最常见的失调信号通路,Wnt信号的异常活化与肝癌起始、发展、侵袭、转移和复发密切相关。有关CYP2E1和Wnt/β-catenin信号通路之间的研究鲜见报道。目的1.CYP2E1在肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞恶性生物学行为的影响;2.CYP2E1抑制肝癌细胞增殖及侵袭转移的机制研究。方法1 CYP2E1在肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞恶性生物学行为的影响1.1应用...

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摘要
Abstract
中英文缩略词表
第一部分 CYP2E1在肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞恶性生物学行为的影响
    前言
    1 主要材料及仪器
        1.1 人肝组织来源及其相关试剂
        1.2 细胞来源及其相关试剂
        1.3 裸鼠来源及其相关试剂
        1.4 其他试剂
        1.5 实验主要仪器
    2 实验方法
        2.1 qRT-PCR
        2.2 Western Blotting
        2.3 细胞培养
        2.4 质粒的扩增
        2.5 慢病毒制备
        2.6 细胞功能试验
            2.6.1 划痕修复实验
            2.6.2 CCK-8实验
            2.6.3 Transwell实验
        2.7 动物实验
            2.7.1 裸鼠皮下成瘤
            2.7.2 裸鼠肺转移模型
            2.7.3 裸鼠肝原位移植瘤
            2.7.4 H&E染色
        2.8 统计方法
    3 实验结果
        3.1 人肝组织标本统计分析
            3.1.1 人肝样本基本信息
            3.1.2 CYP2E1在人肝组织中的表达及临床病理学意义
        3.2 过表达CYP2E1抑制肝癌细胞体外迁移、增殖及侵袭能力
            3.2.1 构建过表达CYP2E1的肝癌细胞系
            3.2.2 过表达CYP2E1对细胞迁移、增殖及侵袭能力的影响
        3.3 过表达CYP2E1抑制肝癌细胞体内增殖及侵袭转移能力
            3.3.1 过表达CYP2E1对裸鼠皮下成瘤能力的影响
            3.3.2 过表达CYP2E1对裸鼠肺转移能力的影响
            3.3.3 过表达CYP2E1对裸鼠肝原位移植瘤形成能力的影响
    4 讨论
    5 结论
第二部分 CYP2E1抑制肝癌细胞增殖及侵袭转移的机制研究
    前言
    1 实验材料及仪器
        1.1 细胞来源及其相关培养试剂
        1.2 细胞qRT-PCR及Western Blotting实验相关试剂
        1.3 其他试剂材料
        1.4 主要抗体
        1.5 主要仪器
    2 实验方法
        2.1 qRT-PCR
        2.2 主要引物序列
        2.3 Western Blotting
        2.4 活性氧(Reactive oxygen species, ROS)检测
        2.5 双荧光素酶报告基因检测
        2.6 免疫共沉淀(Co-IP)实验
    3 结果
        3.1 过表达CYP2E1抑制Wnt/β-catenin信号通路
        3.2 过表达CYP2E1抑制EMT
        3.3 CYP2E1促进Dvl-2泛素化降解
        3.4 CYP2E1增强KLHL12与Dvl-2之间的相互作用促进Dvl-2泛素化降解
        3.5 CYP2E1通过细胞内ROS的生成调控Wn/β-catenin信号通路
    4 讨论
    5 结论
参考文献
综述 ROS在肝癌发生发展中的作用
    参考文献
个人简历
致谢



本文编号：3934001