circARHGAP32在结直肠癌发生发展中功能及机制的初步研究

发布时间：2024-04-02 20:05

　　目的:通过GEO数据库寻找结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)高通量数据,找出差异表达的circRNA,进一步分析筛选出来的circARHGAP32影响结直肠癌的功能与分子机制。方法:1.基于GEO数据库测序分析,筛选出在结直肠癌中高表达的circARHGAP32(has_circ₀024843)。2.采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)验证circARHGAP32在结直肠癌细胞系中的表达情况。3.收集组织样本,包括25例正常结直肠组织与49例CRC组织,用实时荧光定量qRT-PCR检测circARHGAP32的表达情况。4.采用siRNA敲低细胞中circARHGAP32的表达,并构建circARHGAP32的过表达质粒,通过一系列细胞功能实验验证circARHGAP32对结直肠癌细胞系增殖、迁移、侵袭的影响。5.用qRT-PCR检测在敲低和过表达circARHGAP32对EGFR、KRAS、BRAF、MAPK1、MAP3K1 mRNA水平的影响,同时利用Wester...

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
主要缩略语中英文索引
第1章 前言
第2章 实验研究材料与方法
    2.1 实验研究材料
    2.2 实验研究试剂及主要仪器
第3章 实验方法及步骤
    3.1 GEO高通量测序数据处理
        3.1.1 高通量测序数据的差异分析
        3.1.2 绘制热图
    3.2 细胞实验
    3.3 细胞RNA提取
    3.4 RNA浓度检测
    3.5 逆转录
    3.6 PCR引物设计
    3.7 qRT-PCR检测
    3.8 组织RNA提取及检测
    3.9 qRT-PCR表达验证及沉默验证
    3.10 Western Blot检测相关蛋白的表达
第4章 实验结果
    4.1 通过高通量测序数据找出具有表达差异的circRNA
    4.2 通过Morphrus网站绘制热图
    4.3 选定circARHGAP32 为目的基因
    4.4 circARHGAP32在CRC细胞系及CRC组织中高表达
    4.5 CRC细胞系中检测siRNA靶向敲低及过表达circARHGAP32的效率
    4.6 敲低circARHGAP32 能抑制CRC细胞的增殖,过表达circARHGAP32 能促进CRC细胞的增殖
    4.7 敲低circARHGAP32 能抑制CRC细胞的迁移、侵袭,过表达circARHGAP32 能促进CRC细胞的迁移、侵袭
    4.8 circARHGAP32 可通过EGFR相关通路促进CRC增殖、迁移
第5章 讨论
第6章 结论
参考文献
综述
    参考文献
作者攻读学位期间科研成果
致谢



本文编号：3946135