B16黑色素瘤细胞外泌体介导成纤维细胞MMP2、MMP9的表达
发布时间：2024-05-11 08:20
黑色素瘤是一种恶性肿瘤,具有很强的转移能力和极高的致死率。紫外线是黑色素瘤形成中最主要的外源性致癌因素。近年的研究表明,肿瘤的发展不是一个独立事件,肿瘤与肿瘤微环境中间质细胞的相互作用在肿瘤的发展中起着重要作用。外泌体是一种细胞主动分泌的纳米级囊泡,直径约为50150 nm,具有脂质双层膜结构,可以从不同的细胞类型中释放,内含完整的m RNA、mi RNA、蛋白质、脂质等分子。由于肿瘤外泌体可以介导这些信息分子从肿瘤细胞转移到正常间质细胞中,并发挥多种促癌功能,因此肿瘤外泌体被认为是致癌信息的细胞间传递介质,可以介导肿瘤细胞对肿瘤微环境的调控作用。成纤维细胞(MEF)是肿瘤微环境中主要的组成成分,大量研究表明,肿瘤微环境中的成纤维细胞通过分泌MMP2、MMP9进行基质重塑,有利于肿瘤进展,但肿瘤细胞如何实现这一效果还未得到合理解释。还有研究报道,高转移性黑色素瘤细胞可以通过外泌体将其侵袭潜能传递给低转移性的黑色素瘤细胞。由此,我们提出科学假设:黑色素瘤细胞分泌的外泌体可能作为重要信息传递介质,将黑色素瘤细胞的侵袭潜能传递给MEF细胞,促进MEF细胞MMP2、MMP...
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
缩略词表
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 黑色素瘤
1.2 黑色素瘤外泌体研究进展
1.2.1 黑色素瘤外泌体的特征
1.2.2 黑色素瘤外泌体介导的转移性传递
1.2.3 黑色素瘤外泌体介导的血管生成
1.2.4 黑色素瘤外泌体介导的免疫调节
1.2.5 黑色素瘤外泌体介导的转移前生态位形成
1.2.6 黑色素瘤外泌体介导的耐药性
1.3 成纤维细胞在肿瘤进展中的作用
1.3.1 成纤维细胞参与的肿瘤发生
1.3.2 成纤维细胞参与的肿瘤生长
1.3.3 成纤维细胞参与的肿瘤血管生成
1.3.4 成纤维细胞参与的肿瘤侵袭迁移
1.3.5 成纤维细胞参与的肿瘤免疫调节
1.3.6 成纤维细胞参与的肿瘤耐药
1.3.7 成纤维细胞参与的抗肿瘤作用
1.3.8 靶向成纤维细胞进行肿瘤治疗
1.3.9 成纤维细胞参与黑色素瘤的进展
1.4 MMP2、MMP9 在细胞侵袭迁移中的作用
1.5 结语
第二章 引言
2.1 研究背景和意义
2.2 研究内容
第三章 B16F10细胞外泌体的提取与鉴定
3.1 实验材料及设备
3.1.1 细胞培养
3.1.2 实验试剂
3.1.3 实验仪器
3.2 实验方法
3.2.1 超速离心法提取黑色素瘤细胞外泌体
3.2.2 电镜负染色观察外泌体形态结构
3.2.3 粒度仪检测外泌体粒径分布
3.2.4 BCA法测定蛋白浓度
3.2.5 Western blot检测外泌体标志蛋白
3.3 实验结果
3.3.1 外泌体形态结构
3.3.2 外泌体粒径分布
3.3.3 外泌体浓度检测
3.3.4 外泌体标志蛋白检测
3.4 讨论
第四章 黑色素瘤外泌体对MEF细胞MMP2、MMP9 表达的影响
4.1 实验材料及设备
4.1.1 实验动物
4.1.2 细胞培养
4.1.3 实验试剂
4.1.4 实验仪器
4.2 实验方法
4.2.1 荧光共聚焦观察MEF对外泌体的摄取情况
4.2.2 流式细胞仪检测MEF细胞阳性率
4.2.3 Western blot检测MEF细胞MMP2、MMP9 的表达
4.2.4 免疫细胞化学检测MEF细胞MMP2、MMP9 表达
4.2.5 qRT-PCR检测MEF细胞MMP2、MMP9 的表达
4.2.6 Transwell检测MEF细胞的侵袭能力
4.3 实验结果
4.3.1 MEF细胞形态观察
4.3.2 荧光共聚焦与流式细胞仪检测MEF细胞对外泌体的摄取
4.3.3 Western blot检测不同浓度外泌体处理后MEF细胞MMP2、MMP9 的表达
4.3.4 Western blot检测外泌体处理不同时间后MEF细胞MMP2、MMP9 的表达
4.3.5 免疫细胞化学检测外泌体处理后MEF细胞MMP2、MMP9 表达
4.3.6 qRT-PCR检测外泌体对MEF细胞中MMP2、MMP9的mRNA水平影响
4.3.7 Transwell检测外泌体对MEF细胞侵袭能力的影响
4.4 讨论
第五章 总结
参考文献
致谢
读研期间发表的文章
本文编号：3969784
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
缩略词表
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 黑色素瘤
1.2 黑色素瘤外泌体研究进展
1.2.1 黑色素瘤外泌体的特征
1.2.2 黑色素瘤外泌体介导的转移性传递
1.2.3 黑色素瘤外泌体介导的血管生成
1.2.4 黑色素瘤外泌体介导的免疫调节
1.2.5 黑色素瘤外泌体介导的转移前生态位形成
1.2.6 黑色素瘤外泌体介导的耐药性
1.3 成纤维细胞在肿瘤进展中的作用
1.3.1 成纤维细胞参与的肿瘤发生
1.3.2 成纤维细胞参与的肿瘤生长
1.3.3 成纤维细胞参与的肿瘤血管生成
1.3.4 成纤维细胞参与的肿瘤侵袭迁移
1.3.5 成纤维细胞参与的肿瘤免疫调节
1.3.6 成纤维细胞参与的肿瘤耐药
1.3.7 成纤维细胞参与的抗肿瘤作用
1.3.8 靶向成纤维细胞进行肿瘤治疗
1.3.9 成纤维细胞参与黑色素瘤的进展
1.4 MMP2、MMP9 在细胞侵袭迁移中的作用
1.5 结语
第二章 引言
2.1 研究背景和意义
2.2 研究内容
第三章 B16F10细胞外泌体的提取与鉴定
3.1 实验材料及设备
3.1.1 细胞培养
3.1.2 实验试剂
3.1.3 实验仪器
3.2 实验方法
3.2.1 超速离心法提取黑色素瘤细胞外泌体
3.2.2 电镜负染色观察外泌体形态结构
3.2.3 粒度仪检测外泌体粒径分布
3.2.4 BCA法测定蛋白浓度
3.2.5 Western blot检测外泌体标志蛋白
3.3 实验结果
3.3.1 外泌体形态结构
3.3.2 外泌体粒径分布
3.3.3 外泌体浓度检测
3.3.4 外泌体标志蛋白检测
3.4 讨论
第四章 黑色素瘤外泌体对MEF细胞MMP2、MMP9 表达的影响
4.1 实验材料及设备
4.1.1 实验动物
4.1.2 细胞培养
4.1.3 实验试剂
4.1.4 实验仪器
4.2 实验方法
4.2.1 荧光共聚焦观察MEF对外泌体的摄取情况
4.2.2 流式细胞仪检测MEF细胞阳性率
4.2.3 Western blot检测MEF细胞MMP2、MMP9 的表达
4.2.4 免疫细胞化学检测MEF细胞MMP2、MMP9 表达
4.2.5 qRT-PCR检测MEF细胞MMP2、MMP9 的表达
4.2.6 Transwell检测MEF细胞的侵袭能力
4.3 实验结果
4.3.1 MEF细胞形态观察
4.3.2 荧光共聚焦与流式细胞仪检测MEF细胞对外泌体的摄取
4.3.3 Western blot检测不同浓度外泌体处理后MEF细胞MMP2、MMP9 的表达
4.3.4 Western blot检测外泌体处理不同时间后MEF细胞MMP2、MMP9 的表达
4.3.5 免疫细胞化学检测外泌体处理后MEF细胞MMP2、MMP9 表达
4.3.6 qRT-PCR检测外泌体对MEF细胞中MMP2、MMP9的mRNA水平影响
4.3.7 Transwell检测外泌体对MEF细胞侵袭能力的影响
4.4 讨论
第五章 总结
参考文献
致谢
读研期间发表的文章
本文编号：3969784
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