乳腺癌MCF-7细胞p21 WAF1/CIP1 启动子区雌激素受体α的高功能结合位点

发布时间：2024-05-16 03:57

　　目的研究雌激素受体(ER)α募集于p21^WAF1/CIP1启动子区调控其转录活性的具体作用位点,明确辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)及瘦素(leptin)在调节p21^WAF1/CIP1启动子功能中的分子机制。方法将处于对数生长期的乳腺癌MCF-7细胞在无血清培养基中饥饿24 h后,分别用20μmol/L的SAHA 0.88μL(SAHA组)、0.625 nmol/L的leptin 10μL(leptin组)处理24 h,对照组在完全型RPMI-1640培养基中培养细胞。应用染色质免疫共沉淀技术将各组细胞裂解液与ERα抗体孵育,收集纯化结合ERα抗体的DNA片段,应用实时PCR法检测p21^WAF1/CIP1启动子区从转录起始点到其上游(+2^-4 000 bp)f1^f10片段的DNA相对表达量并用2-ΔΔCt法分析。结果对照组中,与ERα抗体结合的f1、f2、f8片段DNA相对表达量较f9片段高出2倍以上(P<0.01)。与对照组比较,SAHA及leptin组f1^f<...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 细胞培养:
        1.2.2使用ERα抗体染色质免疫共沉淀技术 (chro-matin-immunoprecipitation, ChIP) 处理样品:
        1.2.3 实时PCR检测各组p21WAF1/CIP1f1^f10片段的DNA表达:
    1.3 统计学分析
2 结果
    2.1 对照组MCF-7细胞p21WAF1/CIP1启动子区f1^f10片段ERα高功能结合位点的筛选
    2.2 与对照组比较SAHA组及leptin组MCF-7细胞p21WAF1/CIP1启动子区f1^f10片段ERα高功能结合位点的筛选
3 讨论



本文编号：3974653