Bcl-2/Twist1蛋白互作在缺氧促进肝癌血管生成拟态形成中的作用

发布时间：2024-05-19 04:17

　　研究目的缺氧是实体肿瘤微环境的重要特征之一,当肿瘤体积生长至1mm3时,其内部一般都会有相当数量的肿瘤细胞处于缺氧状态。肿瘤可通过多种血管生成方式来缓解自身的缺氧状态。血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)是由恶性肿瘤细胞形成的一种特殊的血液供应模式,其管道的管壁完全由肿瘤细胞而非内皮细胞构成,管腔内含有红细胞,周围没有坏死或炎症浸润。缺氧可以促进肝细胞肝癌VM的形成。本实验室前期研究表明缺氧可以促进Bcl-2蛋白和Twist1蛋白相互结合、作用,最终促进VM的形成,但其具体机制尚不明确。本研究拟探讨缺氧情况下Bcl-2蛋白与Twist1蛋白互作促进VM的机制。研究方法1、比较不同肝细胞肝癌细胞系的Bcl-2、Twist1表达情况,筛选出Hep G2细胞系和Bel7402细胞系。Hep G2细胞系高表达Bcl-2蛋白,低表达Twist1蛋白,Bel7402细胞系与之相反,低表达Bcl-2蛋白,高表达Twist1蛋白。2、应用氯化钴对体外培养的肝癌细胞系进行缺氧,应用western blot、免疫荧光观察缺氧后Bcl-2和Twist1蛋白表达的变化,并应用胶上三维...

【文章页数】：106 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
缩略语
前言
    研究现状、成果
    研究目的、方法
一、缺氧通过Bcl-2/Twist1互作促进VM的形成的机制
    1.1 对象和方法
        1.1.1 实验材料
        1.1.2 所需主要试剂及溶液的配制
        1.1.3 实验方法
        1.1.4 统计学分析
    1.2 结果
        1.2.1 四种肝细胞肝癌细胞系具有不同的Bcl-2、Twist1表达水平
        1.2.2 缺氧对HepG2、Bel7402细胞系Bcl-2、Twist1表达的影响
        1.2.3 缺氧对HepG2、Bel7402细胞系VM形成的影响
        1.2.4 筛选并鉴定稳定过表达Twist1的HepG2细胞以及稳定过表达Bcl-2的Bel7402细胞
        1.2.5 常氧环境下Bcl-2/Twist1共过表达促进Twist1入核
        1.2.6 常氧环境下Bcl-2/Twist1共过表达促进肝癌细胞发生EMT
        1.2.7 常氧条件下Bcl-2/Twist1共过表达促进肝癌细胞干性
        1.2.8 常氧条件下Bcl-2/Twist1共过表达促进VM生成
        1.2.9 筛选并鉴定稳定降表达Bcl-2 的HepG2细胞以及稳定降表达Twist1的Bel7402细胞
        1.2.10降表达Bcl-2 或Twist1减弱缺氧对于EMT和干性的促进作用
        1.2.11降表达Bcl-2 或Twist1减弱缺氧对于VM形成的促进作用。
    1.3 讨论
        1.3.1 缺氧通过促进Bcl-2/Twist1互作来促进VM形成
        1.3.2 Bcl-2/Twist1互作促进VM的机制与EMT、肿瘤细胞干性相关
    1.4 小结
二、裸鼠移植瘤模型中缺氧对Bcl-2/Twist1表达以及VM形成的影响
    2.1 对象和方法
        2.1.1 实验对象
        2.1.2 实验所需细胞
        2.1.3 主要仪器与试剂
        2.1.4 实验方法
        2.1.5 结果判定
        2.1.6 统计学分析
    2.2 结果
        2.2.1 体内缺氧肿瘤细胞经过早期缺氧阶段后生长加快
        2.2.2 体内缺氧促进Bcl-2/Twist1共过表达并促进Twist1入核
        2.2.3 缺氧移植瘤组织中细胞表型向EMT方向转变
        2.2.4 缺氧移植瘤组织中干性相关分子表达增多
        2.2.5 缺氧移植瘤组织中VM形成情况
    2.3 讨论
    2.4 小结
全文结论
论文创新点
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
综述 缺氧在肿瘤中的作用及研究进展
    综述参考文献
致谢



本文编号：3977589